DNase teste ágar base frasco 500g

ÁGAR BASE TESTE DNase - M482 USO PRETENDIDO Ágar base test DNase é recomendado para a detecção da atividade desoxirribonuclease de bactérias e fungos, e principalmente para identificação de Staphylococcus patogênicos. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Triptona: 15.000 peptona de soja: 5.000 Ácido desoxirribonucléico(DNA): 2.000 Cloreto de Sódio: 5.000 Ágar: 15.000 pH final (a 25°C): 7.3±0.2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES Suspender 42g em 1000mL de água destilada. Aqueça com agitação frequente para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a uma pressão de 12 a 15 libras (118°C a 121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45°C e despeje em placas de Petri estéreis. Adicione 0,1g de azul de toluidina (FD051) antes de esterilizar o meio ou encha as placas com solução de azul de toluidina a 0,1% (FD051) após a incubação, conforme desejado. PRINCIPIO E INTERPRETAÇÃO O ágar base teste DNase é usado para detectar a atividade desoxirribonuclease de bactérias e fungos e particularmente para identificação de Estafilococos patogênicos. Com adição de azul de toluidina, é utilizado na diferenciação e identificação de não pigmentados. Espécies de Serratia isoladas de fontes clínicas que podem ser identificadas indevidamente como espécies de Enterobacter e Klebsiella. A correlação entre a atividade da DNase e a atividade da coagulase foi primeiramente estudada por Weckman e Catlin (1). Jeffries et. al., demonstraram a atividade da DNase pelo método da placa de ágar empregando um meio semi-sintético (5). A atividade positiva de DNase foi visualizada como zonas claras (ao redor das colônias) quando as placas foram preenchidas com ácido clorídrico 1N. DiSalvo (2) confirmou a correlação entre a atividade da coagulase e a atividade da DNase incorporando o DNA ao meio junto com o cloreto de cálcio para ativar a enzima. Di Salvo incorporou DNA e cloreto de cálcio para ativar a enzima DNase. Schreier modificou o meio DNase pela adição de azul de toluidina (3). Este meio modificado alcançou uma identificação mais rápida de Serratia marcescens e poderia diferenciar a Serratia de outros membros das Enterobacteriaceae. TIPO DE AMOSTRA Amostras de alimentos e laticínios COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras de acordo com as diretrizes (6,7,8). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISOS E PRECAUÇÕES Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use proteção; luvas/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES: Não Aplicável DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE: Aparência Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo. Gelificação Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado Meio base: Âmbar claro; Após a adição de azul de toluidina (FD051): Forma-se um gel de cor azul, claro a ligeiramente opalescente em placas de Petri Reação Reação de 4.2% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7.3 ± 0.2 pH 7.10 - 7.50 Resposta cultural M482: Características culturais observadas com adição de Azul de Toluidina (FD051) após uma incubação a 35°C - 37°C durante 18 - 24 horas. ORGANISMO: Serratia marcescens ATCC 8100 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: exuberante ATIVIDADE DE DNase: positiva, mudança de cor de azul para roxo rosa ao redor do crescimento quando o azul de toluidina é usado / zona clara ao redor das colônias quando as placas são preenchidas com 1N HCL ORGANISMO: Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 (00034*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: exuberante ATIVIDADE DE DNase: positiva, mudança de cor de azul para roxo rosa ao redor do crescimento quando o azul de toluidina é usado / zona clara ao redor das colônias quando as placas são preenchidas com 1N HCL ORGANISMO: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (00036*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: exuberante ATIVIDADE DE DNase: reação negativa ORGANISMO: Streptococcus pyogenes ATCC 19615 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: exuberante ATIVIDADE DE DNase: positiva, mudança de cor de azul para roxo rosa ao redor do crescimento quando o azul de toluidina é usado / zona clara ao redor das colônias quando as placas são preenchidas com 1N HCL Chave: *Números WDCM correspondentes. ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL Armazenar entre 10°C e 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C e 8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DISPOSIÇÃO O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (11,12). REFERÊNCIAS 1. Weckman and Catlin, 1957, J. Bact., 73:747. 2. Di Salvo, 1958, Med. Tech. Bull., U.S. Armed Forces Med. J., 9:191. 3. Schreir, 1969, Am. J. Clin. Pathol., 51:711. 4. Streitfeld, Hoffman and Janklow, 1962, J. Bact., 84:77. 5. Jeffries C. D., Holtman F., and Guse D. G., 1957, J. Bacteriol., 73:590. 6. American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14th Ed., Washington D.C. 7. Salfinger Y., and Tortorello M.L. Fifth (Ed.), 2015, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 5th Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 8. Wehr H. M. and Frank J. H., 2004, Standard Methods for the Microbiological Examination of Dairy Products, 17th Ed., APHA Inc., Washington, D.C. 9.Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 2nd Edition. 10.Jorgensen,J.H., Pfaller , M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.