Agar eosina azul de metileno - levine emb frasco 500g

Recomendado para o isolamento, contagem e diferenciação de espécies da familia Enterobacteriaceae em amostras clínicas e não clínicas. Composição** Ingredientes Gms / Litro Peptona 10.000 Fosfato dipotássico 2.000 Lactose 10.000 Eosina - Y 0,400 Azul de metileno 0,065 Ágar 15.000 PH final (a 25 ° C) 7,1 ± 0,2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho. Instruções: Suspenda 37,46 gramas em 1000 ml de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver completamente o meio. Esterilizar em autoclave a 15 libras de pressão (121 ° C) por 15 minutos. EVITE O SUPERAQUECIMENTO. Arrefecer até 50 ° C e agitar o meio para oxidar o azul de metileno (isto é, restaurar sua cor azul) e suspender o precipitado, que é uma parte essencial do meio. Precaução: Armazene o meio longe da luz para evitar a foto-oxidação. Princípio e Interpretação O Levine EMB Agar foi desenvolvido por Levine (7,8) e é utilizado para a diferenciação de Escherichia coli e Klebsiella aerogenes e também para a identificação rápida de Candida albicans. Este meio é recomendado para a detecção, enumeração e diferenciação de membros do grupo coliforme pela American Public Health Association (2,9,10). Soldar (11,12) propuseram o uso do Levine EMB Agar, com adição de cloridrato de clortetraciclina, para a rápida identificação de Candida albicans em amostras clínicas. Uma identificação positiva de Candida albicans pode ser feita após 24-48 horas incubação a 35-37 ° C em atmosfera de dióxido de carbono a 10%, de amostras como fezes, secreções orais e vaginais e raspagem de unhas ou pele, etc. No entanto, a aparência típica é variável. A eosina Y e o azul de metileno tornam o meio ligeiramente seletivo e inibem certas bactérias gram-positivas. Esses corantes servem como indicadores diferenciais em resposta à fermentação de carboidratos. Isso ajuda a diferenciar entre lactosefermenters e não fermentadores em EMB Agar, Levine. A proporção de azul de eosina-metileno é ajustada para aproximadamente 6: 1. Os coliformes produzem colônias negras arroxeadas devido à absorção do complexo de corante azul de metileno e eosina, quando o pH cai. O complexo de corante é absorvido na colônia. Os não fermentadores provavelmente aumentam o pH do meio circundante por oxidação desaminação de proteínas, que solubiliza o complexo azul de metileno-eosina, resultando na formação de colônias incolores (4) A peptona serve como fonte de carbono, nitrogênio, aminoácidos de cadeia longa, vitaminas e outros nutrientes essenciais para o crescimento. A lactose serve como fonte de energia por ser o carboidrato fermentável. Eosina-Y e azul de metileno servem como indicadores diferenciais. O fosfato protege o meio. A amostra de teste pode ser listada diretamente nas placas médias. As placas inoculadas devem ser incubadas, protegidas da luz. No entanto, procedimentos padrão devem ser seguidos para obter colônias isoladas. Um meio não seletivo deve ser inoculado em conjunto com o EMB Agar. Testes de confirmação devem ser realizados ainda para identificação de colônias isoladas. Tipo de amostra: Amostras clínicas - urina, Alimentos; Amostras de água. Coleta e manuseio de amostras: Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6). Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, de acordo com as diretrizes (1,3,10). Para amostras de água, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, de acordo com as diretrizes e padrões locais. (2) Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Aviso e Precauções: Apenas para diagnóstico in vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção para os olhos / proteção para o rosto. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. Precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser referidos nas fichas de dados de segurança individuais. Limitações 1. Um meio não seletivo deve ser inoculado em conjunto com o EMB Agar. 2. Testes de confirmação devem ser realizados ainda para identificação de colônias isoladas. 3. Algumas cepas das espécies de Salmonella e Shigella não crescem na presença de eosina e azul de metileno. Desempenho e Avaliação O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com a direção na etiqueta dentro do prazo de validade quando armazenado à temperatura recomendada. Controle de qualidade Aparência: Pó de fluxo livre homogêneo rosa claro a roxo Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Gel opalescente de cor púrpura avermelhada com formas esverdeadas e precipitado finamente disperso em placas de Petri Reação: Reação de solução aquosa a 3,75% p / v a 25 ° C. pH: 7,1 ± 0,2 pH: 6,90-7,30 Resposta cultural Características culturais observadas após uma incubação a 35-37 ° C por 24-48 horas. Resposta cultural Organismo: Candida albicans ATCC 10231 Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante (Incubado em 10% de Dióxido de Carbono) Recuperação:>=50% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Enterobacter aerogenes ATCC 13049 (00175*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Bom Recuperação:40-50% Cor da Colônia: Rosa Avermelhado Organismo: Escherichia coli ATCC 25923 (00013*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Azul-preto com brilho metálico Organismo: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum Recuperação: <=10% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (00025*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Staphylococcus aureus ATCC 6538 (00032*) Inoculação:50-100 Crescimento: Nenhum Recuperação: <=10% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (00026*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Incolor Organismo: Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum Recuperação: <=10% Cor da Colônia: Creme Organismo:Staphylococcus aureus ATCC 25923 (00058*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum Recuperação: <=10% Cor da Colônia:Incolor Organismo: Escherichia coli NCTC 90002 Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Azul-preto com brilho metálico Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inoculação:50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Azul-preto com brilho metálico Armazenamento e prazo de validade: Armazenar abaixo de 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 20-30°C. Use antes da data de validade no rótulo. Em abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, depois de fechar firmemente a garrafa, a fim de evitar a formação de caroços devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegido de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche o recipiente firmemente após o uso. Use antes da data de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado. Descarte: O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6). Referências: 1. Associação Americana de Saúde Pública, Métodos Padrão para o Exame de Produtos Lácteos, 1978, 14ª Ed.,Washington DC. 2. Baird R.B., Eaton A.D. e Rice E.W., (Eds.), 2015, Métodos padrão para o exame de água e águas residuais, 23a ed., APHA, Washington, D.C. 3. Downes F. P. e Ito K., (Ed.), 2001, Compêndio de Métodos para o Exame Microbiológico de Alimentos, 4ª Ed., Associação Americana de Saúde Pública, Washington, D.C. 4.Howard B. J., 1994, Clinical and Pathogenic Microbiology, 2nd Ed., Mosby Year Book, Inc 5. Isenberg, H.D. Procedimentos Clínicos de Microbiologia. 2ª Edição. 6. Jorgensen, J. H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M. L., Richter, S. S. e Warnock., D.W. (2015) Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1 7. Levine M., 1918, J. Infect. Dis., 23:43. 8. Levine M., 1921, Bull. 62, Iowa State College, Engr. Exp. Estação. 9. Marshall R. (Ed.), 1992, Standard Methods for the Examination of Dairy, Products, 16ª ed., APHA Inc., Nova Iorque. 10. Salfinger Y. e Tortorello M.L. Quinta (Ed.), 2015, Compêndio de Métodos para o Exame Microbiológico de Alimentos, 5a Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 11.Weld J. T., 1952, Arch. Dermat. Syph., 66: 691. 12.Weld J. T., 1953, Arch. Dermat. Syph. 67 (5): 433.