Meio mio (motilidade indol ornitina) frasco 500g

MEIO MIO (MEIO MOTILIDADE INDOL ORNITINA) - M378 USO PRETENDIDO Recomendado para a identificação de Enterobacteriaceae com base na motilidade, atividade descarboxilase da ornitina e produção de indol. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Peptona: 10.000 Triptona: 10.000 Extrato de levadura: 3.000 Cloridrato de L-Ornitina: 5.000 Dextrose (Glucose): 1.000 Púrpura de bromocresol: 0,020 Ágar: 2.000 pH final (a 25°C): 6,5±0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES Suspender 31,02g em 1000mL de água purificada/destilada. Aqueça até ferver para dissolver o meio completamente. Dispensar em tubos de ensaio em quantidades de 5mL. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie os tubos na posição vertical. PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO Motilidade, produção de indol e descarboxilação de ornitina são testes bioquímicos de rotina empregados durante a identificação de Enterobacteriaceae. A motilidade pode ser demonstrada microscopicamente (gota suspensa) ou macroscopicamente (método do tubo), onde a motilidade é observada como uma zona difusa de crescimento que se alarga a partir da linha de inoculação. O teste de indol é realizado para determinar a capacidade de um organismo de separar o indol do triptofano pela enzima triptofanase. Na reação com o reagente de Kovacs, o indol combina-se com a cor da camada de álcool, que é visualizada como um anel vermelho (na camada de álcool) (1). Se os organismos do teste possuírem a enzima descarboxilase específica, então a ornitina é descarboxilada em putrescina, uma amina, resultando num aumento subsequente no pH do meio em direção à alcalinidade. Isso faz com que o indicador de pH roxo de bromocresol mude de roxo para amarelo. MIO (Motility Indole Ornithine Medium) é usado para identificação de Enterobacteriaceae com base na motilidade, produção de indol e descarboxilação de ornitina em um único tubo. Este meio foi formulado por Ederer e Clark (2) e avaliado por Oberhofer e Hajkowski (3). A peptona e a triptona fornecem aminoácidos e outras substâncias nitrogenadas. O extrato de levedura é fonte de vitaminas do complexo B. A dextrose é o carboidrato fermentável. As culturas de teste são inoculadas por punção nas extremidades do meio. As reações de motilidade e descarboxilação da ornitina são lidas antes de testar a produção de indol. Com a adição do reagente de Kovacs, a cor do meio muda para amarelo. Portanto, o teste positivo da ornitina descarboxilase (roxo) pode ser mal interpretado como negativo (amarelo). Os organismos fermentam a dextrose para formar ácido, o que faz com que o indicador de pH púrpura de bromocresol mude de roxo para amarelo. Organismos que possuem a enzima ornitina descarboxilase, descarboxilam a ornitina em putrescina, o que aumenta o pH tornando-o alcalino, indicado por uma mudança de cor de amarelo para roxo em todo o meio. A reação negativa da descarboxilase é indicada pela cor amarela ou amarela com uma faixa roxa próxima ao topo do meio. O indol é produzido a partir do triptofano presente na triptona (3,4). O indol produzido combina-se com o aldeído presente no reagente de Kovacs para formar um complexo vermelho. TIPO DE AMOSTRA Microrganismo isolado de amostras clínicas e não clínicas. COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas de manuseio de amostras de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISO E PRECAUÇÕES Uso em diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/ roupas de proteção/ proteção para os olhos/ proteção facial. Siga as boas práticas laboratoriais microbiológicas ao manusear amostras e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As diretrizes de segurança podem ser consultadas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. Devido às variações nutricionais, algumas linhagens podem apresentar baixo crescimento. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções do rótulo dentro do prazo de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROL DE QUALIDADE Apariência: Pó homogêneo de fluxo livre de amarelo claro a verde claro Gelificação: Semissólido, comparável ao gel de ágar 0,2%. Cor e clareza do meio preparado: Formas de gel transparente a levemente opalescente de cor roxa em tubos como pontas Reação: Reação de 3,1% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 6,5 ±0,2 pH: 6.30-6.70 Resposta cultural Características da cultura observadas após incubação a 35°C - 37°C por 40-48 horas. ORGANISMO: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Abundante MOTILIDADE: Positivo, crescimento longe da linha estável causando turbidez PRODUÇÃO DE INDOL: Reação positiva, anel vermelho na interface do meio DESCARBOXILAÇÃO DE ORNITINA: Reação positiva, cor roxo ORGANISMO: # Klebsiella aerogenes ATCC 13048 (00175*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Abundante MOTILIDADE: Positivo, crescimento longe da linha estável causando turbidez PRODUÇÃO DE INDOL: Reação negativa DESCARBOXILAÇÃO DE ORNITINA: Reação positiva, cor roxo ORGANISMO: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Abundante MOTILIDADE: Negativo, crescimento ao longo da linha estável, o meio circundante permanece claro PRODUÇÃO DE INDOL: Reação negativa DESCARBOXILAÇÃO DE ORNITINA: Reção negativa ORGANISMO: Proteus mirabilis ATCC 25933 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Abundante MOTILIDADE: A motilidade depende da temperatura, é mais pronunciada a 20°C e quase ausente a 35°C PRODUÇÃO DE INDOL: Reação negativa DESCARBOXILAÇÃO DE ORNITINA: Reação positiva, cor roxo Chave(*) Números WDCM correspondentes. (#) Anteriormente conhecido como Enterobacter aerogenes ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Armazenar entre 10°C - 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 15°C - 25°C. Use antes da data de validade indicada no rótulo. Ao ser aberto, o produto deve ser armazenado adequadamente e seco, após fechar bem o frasco para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazenar em área seca e ventilada, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche bem o recipiente após o uso. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado. DESCARTE O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos no descarte de materiais infecciosos e o material que entra em contato com a amostra deve ser descontaminado e descartado de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6). REFERÊNCIAS 1. MacFaddin J. F., 2000, Biochemical tests for Identification of Medical Bacteria, 3rd Ed., Lippincott, Williams and Wilkins, Baltimore. 2. Ederer G. M. and Clark M., 1970, Appl. Microbiol., 20:849. 3. Oberhofer J. R. and Hajkowski R., 1970, Am. J. Clin. Pathol., 54:726. 4. Ewing W. H., 1986, Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae, 4th Ed., Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York. 5. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition. 6. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.