Agar base ureia autoclavável frasco 500g

Recomenda-se a base de ágar de uréia com a adição de uréia para a detecção da produção de urease, principalmente pelos membros do gênero Proteus. Composição** Ingredientes Gms / Litro Peptona 1.000 Dextrose (Glicose) 1.000 Cloreto de sódio 5.000 Fosfato dissódico 1.200 Fosfato monopotássico 0,800 Vermelho de fenol 0,012 Ágar 15.000 PH final (a 25 ° C) 6,8 ± 0,2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho Instruções Suspenda 24,01 gramas em 950 ml de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver completamente o meio. Esterilizar em autoclave a 10 libras de pressão (115 ° C) por 20 minutos. Arrefecer até 45-50 ° C e adicionar assepticamente 50 ml de solução estéril de uréia a 40% (FD048) e misture bem. Dispensar em tubos estéreis e deixar na posição inclinada. Não superaqueça ou aqueça o meio como a uréia se decompõe muito facilmente. Princípio e Interpretação O Ágar Base Uréia é usado para detectar a produção de urease. O ágar de uréia descrito por Christensen (3,7) detectou atividade da urease em todos organismos Proteus rapidamente positivos para a urease e também por outros membros de Enterobacteriaceae (3) que exibiram um atraso reação de urease (8). Isso foi realizado por: a) adição de glicose ao meio. b) diminuir a concentração de peptona e c) diminuir o sistema de tamponamento, pois um meio menos tamponado detecta uma quantidade ainda menor de álcalis (4). Peptona é a fonte de nutrientes essenciais. Dextrose é a fonte de energia. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do meio, enquanto os fosfatos servem para tamponar o meio. A uréia é hidrolisada para liberar amônia. Indicador vermelho de fenol detecta a alcalinidade gerada pela alteração visível da cor de laranja para rosa. A incubação prolongada pode causar reação alcalina no meio. Um meio sem uréia serve como controle negativo para governar resultados falsos positivos. Além disso, todos os meios de teste de uréia dependem da formação de alcalinidade e, portanto, não são específicos para determinar a taxa absoluta de atividade da urease (8). A utilização de proteínas pode elevar o pH à alcalinidade devido à hidrólise de proteínas e o excesso de liberação de aminoácidos resulta em reação positiva falsa. Tipo de amostra Isolado puro de amostras. Coleta e manuseio de amostras Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6). Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, de acordo com as diretrizes (1,9,10). Para amostras de água, siga as técnicas apropriadas para coleta, processamento de acordo com as diretrizes e padrões locais (2). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Aviso e Precauções Apenas para diagnóstico in vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção para os olhos / proteção para o rosto. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. Precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser referidas nas fichas de dados de segurança individuais. Limitações 1. Incubação prolongada pode causar reação alcalina no meio. 2. Além disso, todos os meios de teste de uréia dependem da formação de alcalinidade e, portanto, não são específicos para determinar a taxa absoluta de atividade de urease (8). 3. A utilização de proteínas pode elevar o pH à alcalinidade devido à hidrólise de proteínas e excesso de aminoácidos liberação resulta em reação falsa positiva. Desempenho e Avaliação A performance do meio é esperada quando usada conforme a direção na etiqueta dentro do prazo de validade quando armazenada em temperatura recomendada. Controle de qualidade Aparência: Pó de fluxo livre homogêneo amarelo claro a rosa claro. Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Forma de gel de cor laranja claro amarelado a ligeiramente opalescente em tubos na forma inclinada Reação: Reação de solução aquosa a 2,4% p / v a 25 ° C. pH: 6,8 ± 0,2 pH: 6,60-7,00 Resposta cultural Características culturais observadas na adição de solução estéril de uréia a 40% (FD048) após uma incubação a 35-37 ° C por 18-24 horas. Resposta cultural Organismo:Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inoculação:50-100 Urease:Reação Negativa, sem mudança Organismo: #Klebisiella aerogenes ATCC 13048 (00175*) Inoculação:50-100 Urease:Reação Negativa, sem mudança Organismo:Klebisiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*) Inoculação:50-100 Urease:Reação Positiva, cor cerise Organismo:Proteus mirabilis ATCC 25933 Inoculação:50-100 Urease:Reação Positiva, cor cerise Organismo: Proteus vulgaris ATCC 13315 Inoculação:50-100 Urease:Reação Positiva, cor cerise Organismo:Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) Inoculação:50-100 Urease:Reação Negativa, sem mudança Chave: * Números correspondentes do WDCM. # Anteriormente conhecido como Enterobacter aerogenes Armazenamento e prazo de validade Armazenar abaixo de 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Em abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, depois de fechar firmemente a garrafa, a fim de evitar a formação de caroços devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada seca protegido de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche o recipiente firmemente após o uso. Use antes da data de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado. Descarte O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e / ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6). Referências 1. American Public Health Association, Métodos Padrão para o Exame de Produtos Lácteos, 1978, 14ª Ed., Washington DC. 2. Baird R.B., Eaton A.D. e Rice E.W., (Eds.), 2015, Métodos Padrão para o Exame de Água e Águas Residuais, 23 ed., APHA, Washington, D.C. 3. Christensen W.B., 1946, J. Bacteriol., 52: 461. 4. Farmer J. J. III, McWhorter A. C., Huntley G. A., Catignani J., J. Clin. Microbiol. 1975: 1 (1): 106-107. 5. Isenberg, H.D. Manual de Procedimentos de Microbiologia Clínica. 2ª Edição. 6. Jorgensen, J. H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M. L., Richter, S. S. e Warnock., D.W. (2015) Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1 7. MacFaddin J. F, 1985, Meios para Isolamento-Cultivo-Identificação-Manutenção de Bactérias Médicas, vol. 1, Williamsand Wilkins, Baltimore, Maryland. 8. MacFaddin J.F., 2000, Bioochemical Tests for Identification of Medical Bacteria, 3ª Ed., Williams and Wilkins, Baltimore. 9. Salfinger Y. e Tortorello M.L. Quinta (Ed.), 2015, Compêndio de Métodos para o Exame Microbiológico de Alimentos, 5a Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 10. Wehr H.M. e Frank J.H., 2004, Métodos Padrão para o Exame Microbiológico de Produtos Lácteos, 17ª Ed., APHA Inc., Washington, D.C.