Agar base cetrimida frasco 500g

O Ágar Base Cetrimida é utilizado para o isolamento seletivo de Pseudomonas aeruginosa da água e de amostras clínicas. Composição** Ingredientes Gms / Litro Peptona de gelatina 20.000 Cloreto de magnésio 1.400 Sulfato de potássio 10.000 Cetrimida 0.300 Ágar 15.000 PH final (a 25°C) 7,2 ± 0,2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho Instruções: Suspenda 46,7 gramas em 1000 ml de água purificada / destilada contendo 10 ml de glicerol. Aqueça, fervendo, dissolvendo o meio completamente. Esterilize em autoclave a pressão de 15 libras (121°C) por 15 minutos. Arrefecer até 45-50°C. Se desejado, conteúdo reidratado de 1 frasco de suplemento seletivo nalidíxico (FD130) pode ser adicionado assepticamente a 1000 ml de meio. Misture bem e despeje placas de Petri estéreis. Princípio e Interpretação Pseudomonas aeruginosa cresce bem em todos os meios laboratoriais normais, mas no isolamento específico do organismo, locais ambientais ou de fontes humanas, animais ou vegetais, é melhor realizada em um meio que contenha um agente seletivo e também constituintes para melhorar a produção de pigmentos. A maioria dos meios seletivos depende da resistência intrínseca das espécies a vários agentes antibacterianos. A cetrimida inibe o crescimento de muitos microrganismos enquanto permite a Pseudomonas aeruginosa desenvolver colônias típicas. A cetrimida é um sal de amônio quaternário, que atua como um detergente catiônico que reduz a tensão superficial no ponto de contato e tem efeitos precipitantes, complexantes e desnaturantes nas proteínas da membrana bacteriana. Exibe ações inibitórias numa grande variedade de microrganismos, incluindo espécies de Pseudomonas que não sejam Pseudomonas aeruginosa. King e cols. desenvolveu o Meio A para o aprimoramento da produção de piocianina por Pseudomonas (7). Ágar Cetrimida desenvolvido por Lowburry (8) é uma modificação do Tech Agar (meio A) com adição de 0,1% de cetrimida para isolamento seletivo de P.aeruginosa. Posteriormente, devido à disponibilidade da cetrimida altamente purificada, sua concentração no meio foi diminuiu (9). A incubação foi realizada a 37°C por um período de 18 a 24 horas (2). P.aeruginosa pode ser identificada devido à sua produção característica de piocianina, uma substância azul, solúvel em água e não fluorescente. Pigmento fenazina associado à sua morfologia colonial e ao odor característico de aminoacetofenona semelhante a uva (11) P.aeruginosa é a única espécie de Pseudomonas ou bastonete gram-negativo que excreta a piocianina. Os meios de comunicação são, portanto, importantes na identificação de P.aeruginosa. Esses meios são utilizados para o exame de cosméticos (12) e amostras clínicas (3, 11) para a presença de P.aeruginosa, bem como para avaliar a eficácia de desinfetantes contra esse organismo (13). A peptona de gelatina fornece os nutrientes necessários para P.aeruginosa. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico no médio. O cloreto de magnésio e o sulfato de potássio estimulam a produção de piocianina (10). Para o isolamento de P.aeruginosa, as placas de ágar cetrimida devem ser inoculadas a partir de meio não seletivo, como o cérebro Caldo de infusão de coração (M210) ou meio digestivo de caseína de soja (M011). Se a contagem for alta, a amostra de teste pode ser diretamente inoculado em ágar cetrimida. As colônias de P.aeruginosa podem aparecer pigmentadas em azul, verde-azulado ou não pigmentadas. Colônias exibindo fluorescência a 250 nm e uma pigmentação verde azul são considerados positivos presuntivos. P.aeruginosa pode perder sua fluorescência sob UV se as culturas forem deixadas em temperatura ambiente por um curto período de tempo. Fluorescência reaparece após as placas serem incubadas novamente (2). O tipo de peptona utilizada na base também pode afetar a produção de pigmentos (2,4). Certas cepas de P.aeruginosa podem não produzir piocianina. Outras espécies de Pseudomonas não produzem piocianina, mas fluorescem sob luz UV. A maioria das espécies não-Pseudomonas é inibida no ágar cetrimida e algumas espécies de Pseudomonas também podem ser inibidas. Alguns não fermentadores e alguns formadores de esporos aeróbicos podem exibir um bronzeado solúvel em água para pigmentar marrom neste meio. Serratia pode exibir pigmentação rosa (9). Testes bioquímicos e sorológicos procedimentos devem ser realizados para confirmar os achados. Tipo de amostra Amostras clínicas - sangue, urina; Amostras de água Coleta e manuseio de amostras: Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6). Para amostras de água, siga as técnicas apropriadas para coleta, processamento de acordo com as diretrizes e padrões locais (1). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Aviso e precauções: Use apenas em laboratório. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Usar luvas de proteção/vestuário de proteção/olhos proteção/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. Precauções padrões de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas em folhas de dados de segurança individuais. Limitações: 1.Este meio é um meio seletivo, algumas cepas podem apresentar crescimento fraco, pois a cetrimida é altamente tóxica. 2. Mais testes bioquímicos devem ser realizados para confirmação adicional. Desempenho e Avaliação O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com a direção na etiqueta dentro do prazo de validade quando armazenado em temperatura recomendada. Controle de qualidade Aparência: Creme para amarelar pó homogêneo de fluxo livre Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Gel opalescente de cor âmbar clara com ligeiro precipitado em placas de Petri Reação: Reação de solução aquosa 4,67% p/v contendo 1% de glicerol a 25°C. pH: 7,2 ± 0,2 pH: 7.00-7.40 Resposta cultural A resposta cultural foi observada após uma incubação a 30-35°C por tempo especificado. A taxa de recuperação é considerada 100% para crescimento de bactérias no ágar de digestão de caseína de soja. M024: Características culturais observadas após incubação a 30-35°C por 18-72 horas. A taxa de recuperação é considerada como 100% para crescimento de bactérias no ágar de digestão de caseína de soja. Resposta cultural Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (00026*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Valor observado da recuperação do lote: 25-100 Temperatura de Incubação: 30-35°C Período de Incubação: <=18hs Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35°C Período de Incubação: >=72hs Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (00025*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Valor observado da recuperação do lote: 25-100 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: 18-24hs Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 25668 (00114*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Valor observado da recuperação do lote: 25-100 Temperatura de Incubação: 30-35°C Período de Incubação: 18-24hs Organismo: Stenotrophomonas maltophila ATCC 13637 Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35°C Período de Incubação: >=72hs Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Organismo: Escherichia coli 9002 (NCTC) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Organismo: Staphylococcus aureus ATCC 6538 (00032*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Organismo: Staphylococcus aureus ATCC 25923 (00034*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Organismo: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Organismo: Proteus mirabilis ATCC 29906 (00023*) Inoculação: >=10³ Crescimento: Inibido Valor observado da recuperação do lote: 0 Temperatura de Incubação: 30-35ºC Período de Incubação: >=72hs Armazenamento e prazo de validade Armazenar entre 10-30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 20-30°C. Use antes da data de validade em o rótulo. Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, após fechar bem o frasco para evitar grumos formação devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Fechar bem o recipiente depois de usar. Use antes da data de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado. Descarte O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6). Referências: 1. Baird R.B., Eaton A.D. e Rice E.W., (Eds.), 2015, Métodos Padrão para o Exame de Água e Águas Residuais, 23a ed., APHA, Washington, D.C. 2. Brown e Lowbury, 1965, J. Clin. Pathol., 18: 752. 3.Forbes B. A., Sahm A. S. e Weissfeld D. F., Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology, 10a Ed., 1998, Mosby, Inc., St. Louis, Mo. 4. Goto e Enomoto, 1970, Jpn. J. Microbiol., 14:65. 5) Isenberg, H.D. Manual de Procedimentos de Microbiologia Clínica. 2ª Edição. 6. Jorgensen, J. H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M. L., Richter, S. S. e Warnock., D.W. (2015) Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1 7. King, Ward e Raney, 1954, J. Lab. Clin. Med. 44: 301. 8. Lowbury, 1951, J. Clin. Pathol., 4:66. 9. Lowbury e Collins, 1955, J. Clin. Pathol., 8:47 10. MacFaddin J. F., 1985, Meios para Isolamento-Cultivo-Identificação-Manutenção de Bactérias Médicas, vol. Eu Williams e Wilkins, Baltimore. 11. Murray P. R., Barão J. H., Pfaller M. A., Jorgensen J. H. e YolkenR. H., (Ed.), 2003, Manual de Clinical Microbiologia, 8a Ed., Sociedade Americana de Microbiologia, Washington, D.C. 12. Manual Analítico Bacteriológico do USFDA, 2005, 18ª Ed., AOAC, Washington, DC. 13. Williams, (Ed.), 2005, Métodos Oficiais de Análise da Association of Official Analytical Chemists, 19a Ed., AOAC, Washington DC.