Meio Lowenstein Jensen base frasco 500g

MEIO BASE LOWENSTEIN JENSEN (MEIO L.J.) - M162 USO PRETENDIDO: Recomendado para isolamento e cultivo de espécies de Mycobacterium. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/600mL) L-Asparagina: 3.600 Dihidrogenofosfato de potássio: 2.400 Sulfato de magnésio: 0.240 Citrato de magnésio: 0.600 Amido de batata, solúvel: 30.000 verde malaquita: 0.400 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES Suspender 37,24g em 600mL de água purificada/destilada contendo 12mL de glicerol (para bactérias bovinas ou outros organismos glicerofóbicos não é indicado a adição de glicerol). Aqueça, se necessário, para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45°C - 50°C. Enquanto isso, prepare 1000mL de emulsão de ovo coletada assepticamente. Adicione e misture assepticamente a base da emulsão de ovo e o Suplemento Micobacteriano Gruft (FD053) (se desejado) suavemente para obter uma mistura uniforme. Distribua em tubos estéreis com tampa de rosca. Coloque os tubos em uma posição inclinada. Coagule e impregne o meio em banho-maria ou autoclave a 85°C por 45 minutos. PRINCIPIO E INTERPRETAÇÃO Os meios sólidos usados para isolamento e cultivo de micobactérias são à base de ovo ou ágar. Os meios à base de ovos contêm ovos inteiros ou gema de ovo, farinha de batata, sais e glicerol e são solidificados por infusão. Dos meios à base de ovo, o meio Lowenstein Jensen é o mais comumente usado (1). o meio LJ foi originalmente formulado por Lowenstein, contendo corantes vermelho congo e verde malaquita (2). Jensen (3) modificou o meio Lowenstein alterando os teores de citrato e fosfato, eliminando o corante vermelho congo e aumentando a concentração de verde malaquita. Gruft (4,5) modificou ainda mais o meio LJ com adição de dois antimicrobianos para aumentar a seletividade. Este meio suporta o crescimento de uma ampla variedade de micobactérias e também pode ser usado para testes de niacina (6). A penicilina e o ácido nalidíxico (FD053), juntamente com o verde de malaquita, impedem o crescimento da maioria dos contaminantes que sobrevivem à descontaminação da amostra, ao mesmo tempo em que estimulam o crescimento mais precoce possível de micobactérias. A penicilina e o ácido nalidíxico (FD053), juntamente com o verde de malaquita, impedem o crescimento da maioria dos contaminantes que sobrevivem à descontaminação da amostra, ao mesmo tempo em que estimulam o crescimento mais precoce possível de micobactérias. O RNA (FD053) atua como estimulante e ajuda a aumentar a taxa de isolamento de micobactérias. Não adicione glicerol ao meio se forem cultivadas cepas bovinas ou outras cepas glicerofóbicas (7). O verde de malaquita serve como inibidor e também como indicador de pH. A formação da zona azul indica uma diminuição do pH por contaminantes gram-positivos (por exemplo, estreptococos ) e zonas amarelas de destruição do corante por bacilos gram-negativos. Os contaminantes proteolíticos causam digestão localizada ou completa do meio. Hardy et al (8) recomendaram que cada espécime fosse inoculado e incubado em triplicata, a. Identificar saprófitas à temperatura ambiente (25°C). b. Identificar presença ou ausência de pigmentação por fotocromogenes e escotocromogenes a 35°C alternadamente em claro e escuro de acordo com o tipo de organismo. Rotineiramente, o cultivo é realizado aerobiamente a 35°C. TIPO DE AMOSTRA Amostras clínicas: Escarro COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostras clínicas: Consulte as referências apropriadas para procedimentos de teste padrão de descontaminação e isolamento (1,9-12). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISO E PRECAUÇÕES: Uso para diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use proteção; luvas/ vestuário de proteção/ proteção ocular/ proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. Este meio é de uso geral e pode não suportar o crescimento de organismos exigentes 2. Certos contaminantes gram-positivos (por exemplo, estreptococos) e bacilos gram-negativos podem crescer no meio. 3. Certos saprófitos também podem crescer no meio. 4. Contaminantes proteolíticos causam digestão localizada ou completa do meio. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE Aparência Pó homogêneo de fluxo livre de azul esverdeado a amarelo celeste. Cor e clareza do meio preparado A mistura de meio base estéril e emulsão de ovo inteiro, quando espessar, coagula para produzir superfícies lisas opacas de cor verde azulado pálido. Resposta cultural Características culturais observadas na presença de 5% - 10% CO2, com adição de base de emulsão de ovo, após incubação a 35ºC - 37ºC por 2-4 semanas. Organismo: Mycobacterium avium ATCC 25291 Crescimento: exuberante Crescimento com Suplemento Gruft (FD053): muito exuberante Característica da Colônia: colônias lisas e não pigmentadas Organismo: Mycobacterium gordonae ATCC 14470 Crescimento: exuberante Crescimento com Suplemento Gruft (FD053): muito exuberante Característica da Colônia: colônias lisas, amarelas e alaranjadas Organismo: Mycobacterium kansasii ATCC 12478 Crescimento: exuberante Crescimento com Suplemento Gruft (FD053): muito exuberante Característica da Colônia: fotocromogênico, lisa a áspera Organismo: Mycobacterium smegmatis ATCC 14468 Crescimento: exuberante Crescimento com Suplemento Gruft (FD053): muito exuberante Característica da Colônia: colônias brancas cremosas e enrugadas Organismo: M. tuberculosis H37RV ATCC 25618 Crescimento: exuberante Crescimento com Suplemento Gruft (FD053): muito exuberante Característica da Colônia: colônias granulares, ásperas, verrucosas, secas e friáveis ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL Armazenar entre 10°C e 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C e 8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DESCARTE O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (9-12). REFERÊNCIAS 1. Murray P. R., Baron E. J., Jorgensen J. H., Pfaller M. A., Yolken R. H., (Eds.), 8th Ed., 2003, Manual of Clinical Microbiology, ASM, Washington, D.C. 2. Lowenstein E., 1931, Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. 1 Orig., 120:127. 3. Jensen K. A., 1932, Zentralb. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. I Orig., 125:222. 4. Gruft, 1971, Health Lab. Sci., 8:79. 5. Gruft, 1963, Am. Rev. Respir. Dis., 88:412. 6. Boisvert H., 1960, Ann. Inst. Pasteur, 99:600. 7. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore. 8. A.V. Hardy, et al, Am. J. Publ. Hlth. 48(1), 754 (1958) 9. Isenberg, (Ed.), Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition 10. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 11. Cernoch P., Enns R., Saubolle M. and Wallace R., 1994, Cumitech, 16A, Laboratory Diagnosis of the Mycobacterioses coord , Ed., Weissfeld , ASM, Washington, D. C. 12. Forbes B. A., Sahm A. S. and Weissfeld D. F., Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology, 10th Ed., 1998, Mosby, Inc., St. Louis, Mo.