Hicrome lactobacillus seletivo ágar base frasco 500g

ÁGAR BASE CROMOGÊNICO SELETIVO LACTOBACILLUS (M2065) USO PRETENDIDO Recomendado para isolamento e diferenciação entre espécies de Lactobacillus de uma cultura mista por método cromogênico de amostras de laticínios. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Peptona: 10.000 Extrato HM#: 1.000 Proteina M em pó##: 5.000 D-Mannitol: 10.000 Cloreto de sodio: 10.000 Mistura cromogênica: 3.200 Vermelho de fenol: 0.025 Ágar: 15.000 pH final (a 25°C): 7.1 ± 0.2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho # Equivalente a Extrato de Carne ## Equivalente à Proteína do Leite INSTRUÇÕES Suspender 54,22g em 1000mL de água purificada/destilada. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121ºC) por 15 minutos. Resfrie a 45°C - 50°C. Adicione assepticamente o conteúdo reidratado de 1 frasco de Suplemento Seletivo Cip (FD345). Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis. PRINCIPIO E INTERPRETAÇÃO Lactobacillus é um gênero de bactérias Gram-positivas, anaeróbias facultativas ou microaerófilas, em forma de bastonete, não formadoras de esporos. Elas são uma parte importante do grupo de bactérias do ácido láctico. À medida que mais LABs foram desenvolvidos e vendidos em formas mistas como probióticos, é necessário desenvolver um método para contar cada LAB em uma mistura (1). O meio contém peptona e extrato de HM, que fornecem compostos nitrogenados e carbonáceos, aminoácidos de cadeia longa, vitaminas e outros nutrientes essenciais. O manitol serve como carboidrato fermentável, cuja fermentação pode ser detectada pelo vermelho de fenol. A proteína M auxilia na detecção da atividade de hidrólise da caseína. A mistura cromogênica presente no meio é clivada pela enzima beta-glucosidase, resultando em colônias de cor azul esverdeado a azul. Para o isolamento seletivo de Lactobacillus, é adicionado o Suplemento Seletivo Cip (FD345) que inibe as bactérias acompanhantes. TIPO DE AMOSTRA Amostras de laticínios: Leite e derivados COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostra de laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras de acordo com as diretrizes (2,3). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISO E PRECAUSÕES Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/ vestuário de proteção/ proteção ocular/ proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. Organismos individuais diferem em suas necessidades de crescimento e podem apresentar padrões de crescimento variáveis no meio. 2. Cada lote do meio foi testado para os organismos especificados no certificado de análise (COA). Recomenda-se aos usuários validar o meio para qualquer microrganismo específico diferente do mencionado certificado de análise (COA) com base no requisito exclusivo do usuário. 3. Poderão ser observadas pequenas variações de cor dependendo da utilização do substrato pelo organismo. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE Apariência: Pó homogêneo de fluxo livre de amarelo claro a rosa Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Forma de gel da cor vermelha, transparente a levemente opalescente em placas de Petri Reação: Reação de 5,42% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7,1 ± 0,2 pH 6,90-7,30 Resposta da Cultura Características culturais observadas após uma incubação a 25°C -30°C por 24-48 horas com adição de suplemento seletivo Cip (FD345)(com 5% CO2). ORGANISMO: Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 (00098*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% COR DA COLÔNIA: Rosa pálido - rosa ORGANISMO: Lactobacillus casei ATCC 9595 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% COR DA COLÔNIA: Verde claro ORGANISMO: Lactobacillus fermentum ATCC 9338 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% COR DA COLÔNIA: Amarelo ORGANISMO: Lactobacillus plantarum ATCC 8014 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% COR DA COLÔNIA: Colônias verde claro com fundo escuro ORGANISMO: Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435 (00016*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% COR DA COLÔNIA: Colônias verde claro com fundo escuro ORGANISMO: Bacillus subtilis subsp. spizizenii ATCC 6633 (00003*) INÓCULO (UFC): >=10^4 CRESCIMENTO: Inibido RECUPERAÇÃO: 0% COR DA COLÔNIA: - ORGANISMO: Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 6538 (00032*) INÓCULO (UFC): >=10^4 CRESCIMENTO: Inibido RECUPERAÇÃO: 0% COR DA COLÔNIA: - ORGANISMO: Bacillus cereus ATCC 10876 INÓCULO (UFC): >=10^4 CRESCIMENTO: Inibido RECUPERAÇÃO: 0% COR DA COLÔNIA: - Chave: (*) Números WDCM correspondentes ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Armazene entre 15°C - 25°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C - 8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Ao abrir, o produto deve ser armazenado adequadamente seco, após tampar bem o frasco para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazene em área seca e ventilada, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche bem o recipiente após o uso. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade. DESCARTE O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos no descarte de materiais infecciosos e o material que entrar em contato com a amostra deve ser descontaminado e descartado de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (4,5). REFERÊNCIAS 1.De Man, J.C., Rogosa, M. and Sharpe, E.M. (1960) A medium for the cultivation of lactobacilli. J Appl Bacteriol 23, 30–35. 2.American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14th Ed., Washington D.C. 3.Wehr H. M. and Frank J. H., 2004, Standard Methods for the Microbiological Examination of Dairy Products, 17th Ed., APHA Inc., Washington, D.C. 4.Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition. 5.Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.