Agar m17 base frasco 500g

ÁGAR BASE M17 (M929) USO PRETENDIDO Recomendado para cultivo de estreptococos láticos e ensaio de placa de bacteriófagos láticos. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Peptona: 5,000 Peptona de soja: 5,000 Extrato de levedura: 2,500 HM peptona B#: 5,000 Ácido ascórbico: 0,500 Sulfato de magnésio: 0,250 Lactose: 5,000 Ágar: 10,000 pH final (a 25°C): 7.1±0.2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho # Equivalente ao extrato de carne bovina INSTRUÇÕES Suspender 33,25g em 1000mL de água purificada/destilada. Adicionar 19g de ß-glicerofosfato dissódico. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45°C - 50°C. Misture bem e dispense conforme desejado. PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO Os meios M17 são baseados na formulação descrita por Terzaghi e Sandine (9) para o cultivo e enumeração de Streptococos láticos e seus bacteriófagos. É possível estudar a morfologia e lisogenia da placa. O Ágar M17 é recomendado pela International Dairy Federation (3) para a contagem seletiva de Streptococcus thermophilus do iogurte. O Ágar M17 é recomendado pela APHA para o cultivo de estreptococos lácticos (7). Streptococcus láticos são nutricionalmente exigentes e requerem meios complexos para crescimento ideal (2,6). Glicerofosfato dissódico mantém o pH acima de 5,7. A manutenção do pH é muito importante, pois um pH mais baixo resulta em lesões e redução da recuperação de estreptococos láticos. O glicerofosfato não forma precipitado com cálcio que é necessário para o ensaio de placa de bacteriófagos láticos. Peptona, peptona de soja, extrato de levedura e HM peptona B fornecem compostos carbonáceos e nitrogenados, aminoácidos de cadeia longa, complexo de vitamina B e outros fatores de crescimento essenciais. A lactose é o carboidrato fermentável e o ácido ascórbico é estimulador do crescimento de estreptococos láticos. O sulfato de magnésio fornece íons essenciais aos organismos. Glicerofosfato dissódico mantém o pH acima de 5,7. A manutenção do pH é muito importante, pois um pH mais baixo resulta em lesões e redução da recuperação de estreptococos láticos. Glicerofosfato dissódico suprime Lactobacillus bulgaricus. Shankar e Davies (8) relataram isolamento e contagem de Streptococcus thermophilus de iogurte. O M17 Agar também é recomendado pela International Dairy Federation (3) para a contagem seletiva de Streptococcus thermophilus de iogurte. Também é adequado para cultivo e manutenção de culturas iniciadoras para fabricação de queijos e iogurtes. Este meio ajuda na detecção de mutantes estreptocócicos que não fermentam a lactose. A técnica sugerida para contagem de estreptococos é semear em massa ou esfaquear com ágar, derretido e resfriado a 50-55°C e incubando-os a 42°C por um período de 24 horas. Com essas condições, todas as colônias podem ser estreptococos. Períodos de incubação mais longos ou temperaturas mais baixas podem causar alterações morfológicas nas colônias, o que dificulta o reconhecimento das colônias. As colônias de estreptococos positivos para lactose são visíveis após 15 horas e após 5 dias podem atingir um diâmetro de cerca de 3mm - 4mm, enquanto as de negativos para lactose têm 1mm de diâmetro. A presença de bacteriófagos é observada pelo aparecimento de placas características ao longo do crescimento bacteriano. TIPO DE AMOSTRA Amostras de alimentos e laticínios COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS A técnica sugerida para contagem de estreptococos é semear em massa ou esfaquear com ágar, derreter e resfriar a 50°C - 55°C e incubar a 42°C por um período de 24 horas. Com essas condições, todas as colônias podem ser estreptococos. Períodos de incubação mais longos ou temperaturas mais baixas podem causar alterações morfológicas nas colônias, o que dificulta o reconhecimento das colônias. As colônias de estreptococos positivos para lactose são visíveis após 15 horas e após 5 dias podem atingir um diâmetro de cerca de 3mm - 4mm, enquanto as de negativos para lactose têm 1mm de diâmetro. A presença de bacteriófagos é observada pelo aparecimento de placas características ao longo do crescimento bacteriano. AVISO E PRECAUÇÕES Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/ vestuário de proteção/ proteção ocular/ proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e cultura. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. A manutenção do pH é muito importante, pois um pH mais baixo resulta em lesões e reduz a recuperação de estreptococos lácticos. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE Apariência: Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,0%. Cor e clareza do meio preparado: Forma de gel na cor amarela clara a ligeiramente opalescente em placas de Petri. Reação: Reação de 3,33% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7,1±0,2 pH: 6,90-7,30 Resposta cultural: Características culturais observadas após incubação a 35-37°C por 24-48 horas com adição de ß-Glicerofosfato dissódico. ORGANISMO: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% ORGANISMO: Lactobacillus bulgaricus subsp. bulgaricus ATCC 11842 (00102*) INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: nada pobre RECUPERAÇÃO: <=10% ORGANISMO: Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% ORGANISMO: Lactobacillus plantarum ATCC 8014 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% ORGANISMO: Streptococcus thermophilus ATCC 14485 INÓCULO (UFC): 50-100 CRESCIMENTO: Bem abundante RECUPERAÇÃO: >=50% Chave: *Números WDCM correspondentes. ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Armazene entre 10°C - 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 20°C - 30°C. Use antes da data de validade no rótulo. Ao abrir, o produto deve ser armazenado adequadamente seco, após tampar bem o frasco para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazene em área seca e ventilada, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche bem o recipiente após o uso. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade. DESCARTE O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos no descarte de materiais infecciosos e o material que entrar em contato com a amostra deve ser descontaminado e descartado de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (4,5). REFERÊNCIAS 1. American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14th Ed., Washington D.C. 2. Anderson A.W. and Elliker P.R., 1953, J. Dairy Sci., 36:161. 3. International Dairy Federation, 1981, Joint IDF/ISO/AOAC Group E44. 4. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition. 5. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 6. Reiter B. and Oran J.D., 1962, J. Dairy Res., 29:63. 7. Salfinger Y., and Tortorello M.L., 2015, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 5th Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 8. Shankar P.A. and Davies F.L., 1977, Soc. Dairy Technol., 30:28. 9. Terzaghi B.E. and Sandine W.E., 1975, Appl. Microbiol., 29:807. 10.Wehr H. M. and Frank J. H., 2004, Standard Methods for the Microbiological Examination of Dairy Products, 17th Ed., APHA Inc., Washington, D.C.