Agar bile esculina frasco 500g

O Ágar Bile Esculina é um meio diferencial recomendado para isolamento e identificação presuntiva do grupo D Estreptococos em alimentos e produtos farmacêuticos. Composição** Ingredientes Gms / Litro Peptona 5.000 HM peptona B . 3.000# Bile . 40.000 Esculin 1.000 Citrato férrico 0,500 Ágar 15.000 PH final (a 25°C) 6,6 ± 0,2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho # Equivalente ao extrato de carne bovina ##Equivalente a Oxgall Instruções: Suspenda 64,5 gramas em 1000 ml de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver completamente o meio. Misture e distribua em tubos ou frascos conforme desejados. Esterilize em autoclave a pressão de 15 libras (121 ° C) por 15 minutos. Deixe o meio tubular solidificar em posição inclinada. Princípio e Interpretação Os estreptococos do grupo D possuem o antígeno do ácido lipoteicóico do grupo D em suas paredes celulares. Ex-espécies do grupo D, que são habitantes normais predominantes do trato gastrointestinal humano, são denominados estreptococos fecais ou enterococos (1). O Meyer e Schonfeld (2) relataram uma capacidade única dos enterococos de dividir a esculina. Enterococos e Estreptococos do Grupo D hidrolisar a esculina em esculetina e dextrose, que reage com o citrato férrico produzindo precipitado preto acastanhado (3). O uso da hidrólise da esculina na identificação dos enterococos foi citado pela primeira vez por Rochaix (4). O ágar de bile esculina foi originalmente formulado por Swan (6) para o isolamento e identificação de estreptococos do grupo D a partir de alimentos. Facklam e Moody (7,8) relataram ainda que usando o ágar bile-esculina, os estreptococos do grupo D poderiam ser diferenciados dos estreptococos do grupo D não. O Ágar Bile Esculina também demonstrou auxiliar na diferenciação de Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter, Serratia e outros Gêneros de Enterobacteriaceae (9) com base na hidrólise da esculina. No entanto, outros testes, como tolerância ao sal, devem realizada para identificação dos enterococos (5). O meio é altamente nutritivo. Peptona e HM peptona B servem como fontes de carbono, nitrogênio, aminoácidos, vitaminas e nutrientes essenciais para o crescimento. A bile inibe a maioria das outras bactérias que a acompanham. A esculina no meio é hidrolisada para esculetina e dextrose. A esculetina reage com o citrato férrico para formar um complexo marrom escuro ou preto, visualizado como uma zona de precipitado preto ao redor das colônias. Se o meio for dispensado em tubos na forma de inclinações, uma reação positiva é indicada escurecendo mais da metade da inclinação em 24 a 48 horas. Se o escurecimento estiver totalmente ausente ou se menos da metade da inclinação é escurecido dentro de 24-48 horas, o teste é negativo. Os estreptococos de Viridans às vezes exibem uma reação positiva fraca. Além disso, As espécies de Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus que causam infecções humanas apresentam um teste positivo de esculina biliar (10). Para melhorar o crescimento de Enterococos, ágar bile-esculina pode ser suplementado com 50 ml / l de soro de cavalo (3). Inocule e incube a amostra de teste em Todd Hewitt Broth (M313). Após 24 horas de incubação, adicione duas gotas da cultura sobre a superfície do meio inclinado ou da placa (3, 5). Tipo de amostra: Amostras de alimentos. Coleta e manuseio de amostras: Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, de acordo com as diretrizes (12,13,14). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Aviso e precauções Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. Precauções padrão conforme diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As diretrizes de segurança podem ser consultadas em fichas de dados de segurança individuais. Limitações: Este meio é um meio de uso geral e pode não suportar o crescimento de organismos exigentes. Desempenho e Avaliação: O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com a direção na etiqueta dentro do prazo de validade quando armazenado em temperatura recomendada. Controle de qualidade Aparência: Pó de fluxo livre homogêneo amarelo claro a amarelo acastanhado Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Gel de cor âmbar, transparente a ligeiramente opalescente, com uma coloração azulada nas placas de Petri ou nos tubos como inclinações. Reação: Reação de solução aquosa de 6,5% p/v a 25°C. pH: 6,6 ± 0,2 pH: 6,40-6,80 Resposta cultural Características culturais observadas em uma atmosfera aumentada de dióxido de carbono após uma incubação a 35-37°C por 18-24 horas. Resposta cultural Organismo: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Hidrólise Esculina: Reação positiva, escurecimento do meio ao redor do colônia. Organismo: Proteus mirabilis ATCC 25933 Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Hidrólise Esculina: Reação negativa Organismo: Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum Recuperação: <=10% Hidrólise Esculina: Reação negativa Armazenamento e prazo de validade: Armazenar entre 10-30 ° C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 20-30 ° C. Use antes da data de validade em o rótulo. Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, depois de fechar bem o frasco para evitar grumos formação devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Fechar bem o recipiente depois de usar. Use antes da data de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado. Descarte: O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (10,11). Referências: 1. Koneman E. W., Allen S. D., Janda W. M., Schreckenberger P. C., Winn W. C. Jr., 1992, Color Atlas e Textbook of Diagnostic Microbiology, 4ª Ed., J. B. Lippinccott Company 2. Meyer e Schonfeld, 1926, Zentralbl. Bakeriol, Parasitenk. Infecçõeskr. Hyg. Abt. Orig. 99: 402. 3. MacFaddin J. F., 1985, Media para Isolamento-Cultivo-Identificação-Manutenção de Bactérias Médicas, vol. Eu Williams e Wilkins, Baltimore. 4. Rochaix, 1924, Comt. Rasgar. Soc. Biol. 90: 771. 5. Facklam R., 1973, Appl. Microbiol., 26: 138. Swan, 1954, J. Clin. Pathol., 7: 160. 6. Facklam R., 1972, Appl. Microbiol., 23: 1131. 7. Facklam R.R e Moody M. D., 1970, Appl. Microbiol., 20 (2): 245. 8. Edberg S. C., Pittman S. e Singer J. M., 1977, J. Clin. Microbiol., 6: 111. 9. Murray P. R., Barão E. J., Jorgensen J. H., Pfaller M. A., Yolken R. H., (Eds.), 8ª Ed., 2003, Manual of Clinical Microbiology,ASM, Washington, D.C. Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1 10. Isenberg, H.D. Procedimentos Clínicos de Microbiologia. 2ª Edição. 13. Salfinger Y. e Tortorello M.L. Quinta (Ed.), 2001, Compêndio de Métodos para o Exame Microbiológico de Foods, 5th Ed., Associação Americana de Saúde Pública, Washington, D.C. 12. Associação Americana de Saúde Pública, Métodos Padrão para o Exame de Produtos Lácteos, 1978, 14ª Ed., Washington D.C. 14. Wehr H. M. e Frank J. H., 2004, Métodos Padrão para o Exame Microbiológico de Produtos Lácteos, 17ª Ed., APHA Inc., Washington, D.C.