Macconkey sorbitol ágar base frasco 500g

ÁGAR MACCONKEY SORBITOL (ÁGAR SORBITOL) - M298 USO PRETENDIDO Recomendado para isolamento e identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicas associadas à diarreia infantil. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Peptona: 17.000 Proteose peptona: 3.000 D-sorbitol: 10.000 Mistura de sais biliares: 1.500 Cloreto de sódio: 5.000 Vermelho neutro: 0.030 Cristal violeta: 0.001 Ágar: 13.500 pH final (a 25°C): 7,1 ± 0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES Suspender 50,03g em 1000mL de água purificada/destilada. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. EVITE O SUPERAQUECIMENTO. Resfrie a 45°C - 50°C. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis. PRINCIPIOS E INTERPRETAÇÃO Ágar MacConkey Sorbitol é baseado na formulação descrita por Rappaport e Henigh (1). Este meio é recomendado para isolamento de Escherichia coli O157: H7 enteropatogênica , que fermenta a lactose, mas não fermenta o sorbitol, portanto produz colônias incolores. Este organismo foi reconhecido como causa de colite hemorrágica (2). E.coli O157: H7 é um patógeno humano associado à colite hemorrágica que resulta da ação de uma toxina semelhante a shiga (SLT) (3,4). No Ágar MacConkey padrão contendo lactose, esta cepa é indistinguível de outras E.coli fermentadoras de lactose. No Ágar Base MacConkey Sorbitol, a lactose é substituída por sorbitol. Ao contrário da maioria das cepas de E.coli, E.coli O157:H7 fermenta o sorbitol lentamente ou não fermenta (5,6). O crescimento de E.coli O157:H7 em Ágar MacConkey com Sorbitol mostra colônias incolores e a maioria da flora fecal fermenta sorbitol e aparece rosa. Ágar MacConkey com Sorbitol, portanto, permite o reconhecimento imediato de E.coli O157:H7 (3,4,7). Peptona e proteose peptona fornecem nutrientes necessários como compostos nitrogenados e carbonáceos, aminoácidos de cadeia longa, minerais, vitaminas e ingredientes de rastreamento para o crescimento de organismos. O cristal violeta e a mistura de sais biliares presentes no meio inibem o crescimento de bactérias gram-positivas. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O vermelho neutro é um indicador. D-Sorbitol é o carboidrato fermentável. TIPO DE AMOSTRAS Amostras clínicas - amostras de fezes, alimentos e laticínios. COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para manusear amostras de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,8). Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras de acordo com as diretrizes (9,10,11). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS Uso para diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use proteção; luvas/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. Ágar MacConkey Sorbitol , não deve ser usado exclusivamente para detectar cepas patogênicas de E.coli O157: H7, pois algumas cepas não tóxicas também não fermentam o sorbitol (4). 2.Outros testes bioquímicos devem ser realizados para posterior confirmação. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE Aparência Pó homogêneo de fluxo livre de amarelo claro a rosa. Gelificação Firme, comparável com gel de ágar a 1,35% Cor e clareza do meio preparado Forma de gel da cor vermelha arroxeada, transparente a levemente opalescente em placas de Petri Reação Reação de 5.0% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7.1 ±0.2 pH 6.90 - 7.30 Resposta em cultura Características culturais observadas após uma incubação a 35-37°C durante 18-24 horas. Organismo: Salmonella Typhi ATCC 6539 Inóculo (UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor de colônia: Organismo: Shigella flexneri ATCC 12022 (00126*) Inóculo (UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor de colônia: Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inóculo (UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor de colônia: Organismo: Escherichia coli serotype O11 and O55 Inóculo (UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor de colônia: Organismo: Escherichia coli O157:H7 NCTC 29900 Inóculo (UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor de colônia: Chave: *Números WDCM correspondentes. ARMAZENAMENTO E VIDA UTIL Armazenar entre 10°C e 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 20°C e 30° C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DISPOSIÇÃO O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,8). REFERÊNCIAS 1. Rappaport F. and Henigh E., 1952, J. Clin. Pathol., 6 : 361. 2. Karmali M. A., Petric M., Lim C. et al, 1985, J. Infect. Dis.,151:775. 3. Centre for Diseases Control, 1991, Morbid. Mortal, Weekly Rep 40:265. 4. March S. B. and Ratnam S., 1986, J. Clin. Microbiol., 23:869. 5. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 2nd Edition. 6. Pelczar M. J., Chan E. C. and Kreig M. R., 1986, Microbiology, 5th Ed., McGraw Hill Book Co., New York. 7. Murray P. R., Baron J. H., Pfaller M. A., Tenover F. C. and Yolken R. H. (Ed.), 1999, Manual of Clinical Microbiology, 7th Ed. American Society for Microbiology, Washington, D. C. 8. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 9. American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14th Ed., Washington D.C. 10. Salfinger Y., and Tortorello M.L. Fifth (Ed.), 2015, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 5th Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 11. Wehr H. M. and Frank J. H., 2004, Standard Methods for the Microbiological Examination of Dairy Products, 17th Ed., APHA Inc., Washington, D.C.