Cetrimide ágar base com 1,3% ágar frasco 500g

ÁGAR BASE CETRIMIDA (COM 1,3% DE ÁGAR) - M1742 USO PRETENDIDO: Recomendado para o isolamento seletivo de Pseudomonas aeruginosa de diversos materiais. COMPOSIÇÃO: Ingredientes (g/L) Peptona gelatina: 20.000 Cloreto de magnesio: 1.400 Sulfato de potássio: 10.000 Cetrimida: 0.300 Agar: 13.000 pH final (a 25°C): 7.0±0.2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES: Suspender 44,7g em 1000mL de água purificada/destilada contendo 10mL de glicerina/glicerol. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45°C - 50°C. Se desejado, o conteúdo reidratado de 1 frasco de suplemento seletivo NA (FD130) pode ser adicionado assepticamente a 1000mL de meio. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis. PRINCIPIOS E INTERPRETAÇÕES: Ágar base cetrimida com 1,3% de ágar é recomendado como meio seletivo para isolamento de Pseudomonas aeruginosa. É semelhante em composição conforme citado em várias farmacopeias (1,2,3,4), exceto que a concentração de ágar neste meio é de 1,3%. A fórmula original foi descrita por King et. al.,(5). Também pode ser usado para determinar a capacidade de um organismo de produzir fluoresceína e piocianina. A Cetrimida (Brometo de tetradeciltrimetilamônio)no meio atua como um agente seletivo inibindo bactérias diferentes de Pseudomonas aeruginosa. É um sal de amônio quaternário, que atua como um detergente catiônico que reduz a tensão superficial no ponto de contato e tem efeitos precipitantes, complexantes e desnaturantes sobre as proteínas da membrana bacteriana. Exibe ações inibitórias em uma ampla variedade de microorganismos, incluindo espécies de Pseudomonas diferentes de Pseudomonas aeruginosa. O cloreto de magnésio e o sulfato de potássio incorporados ao meio aumentam a produção do pigmento piocianina, que é um pigmento verde-azulado, que se difunde no meio. Isso melhora a detecção de Pseudomonas neste meio. A presença de íons de magnésio também pode neutralizar o EDTA, se presente na amostra. A peptona gelatina fornece os nutrientes essenciais para o crescimento de Pseudomonas, enquanto a glicerina/glicerol serve como fonte lenta e contínua de carbono para a célula em crescimento. King et. al., desenvolveram o Meio A para aumentar a produção de piocianina em Pseudomonas (5). O ágar Cetrimide desenvolvido por Lowburry (6) é uma modificação do ágar Tech (Meio A) com adição de 0,1% de cetrimida para isolamento seletivo de P. aeruginosa. Mais tarde, devido à disponibilidade da cetrimida altamente purificada, sua concentração no meio foi diminuída (7). A incubação foi realizada a 370°C por um período de 18-24 horas (8). P. aeruginosa pode ser identificada devido à sua produção característica de piocianina, um pigmento de fenazina azul, solúvel em água e não fluorescente, juntamente com sua morfologia colonial e o odor característico de uva de aminocetofenona(9). Para o isolamento de P. aeruginosa, placas de ágar cetrimida devem ser inoculadas a partir de meio não seletivo, como caldo de infusão cérebro e coração (M210) ou meio de digestão de caseína de soja (M011). Se a contagem for alta, a amostra de teste pode ser diretamente inoculado em ágar cetrimida. As colônias de P. aeruginosa podem aparecer azuis, verde-azuladas ou não pigmentadas. As colônias exibem fluorescência em 250nm e uma pigmentação azul esverdeada são consideradas como presuntivamente positivas. P. aeruginosa pode perder sua fluorescência sob UV se as culturas forem deixadas em temperatura ambiente por um curto período de tempo. A fluorescência reaparece após as placas serem reincubadas. Goto e Enomoto recomendaram que a adição de ácido nalidíxico auxilia na inibição do crescimento da flora acompanhante (10). TIPO DE AMOSTRA: Amostras clínicas - pus, urina COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS: - Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para manusear amostras de acordo com as diretrizes estabelecidas (11,12). - Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISO E PRECAUÇÕES: Uso para diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use proteção; luvas/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES: 1. Algumas cepas de Pseudomonas , exceto as espécies aeruginosa , podem apresentar crescimento deficiente, pois a cetrimida é altamente tóxica. 2. Outros testes bioquímicos e sorológicos devem ser realizados para identificação completa. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO: O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE: Aparência Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo. Gelificação Firme, comparável com gel de ágar a 1,3% Cor e clareza do meio preparado Cor âmbar claro, opalescente com forma de leve precipitado em placas de Petri. Reação Reação de 4.47% p/v em solução aquosa contendo 1,0% de glicerol a 25°C. pH: 7.0 ± 0.2 pH 6.80 - 7.20 Resposta cultural Características culturais observadas com suplemento seletivo de NA adicionado(FD130) após uma incubação a 35-37°C por 24-48 horas Organismo: Pseudomonas eruginosa ATCC 9027 (00026*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Luxuriante (com pigmento verde amarelo) Recuperação: >=50 % Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (00025*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Luxuriante (com pigmento verde amarelo) Recuperação: >=50 % Organismo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 25668 (00114*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Luxuriante (com pigmento verde amarelo) Recuperação: <=0 % Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Proteus mirabilis ATCC 29906 (00023*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637 Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 25923 (00034*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Escherichia coli NCTC 9002 Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Staphylococcus aureus NCIMB 9518 Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Organismo: Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 6538 (00032*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: - Chave: *Números WDCM correspondentes ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL Armazenar entre 10°C e 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C e 8° C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DISPOSIÇÃO O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (11,12). REFERÊNCIAS: 1.The British Pharmacopoeia, 2022, Medicines and Healthcare products Regulatory Agency. 2. European Pharmacopoeia, 2022, 10 th volume, European Directorate for the quality of medicines & Healthcare. 3. The Japanese Pharmacopoeia, 17th edition, 2016, The Ministry of Health, Labour and welfare. 4. The United States Pharmacopoeia-National Formulatory (USP-NF), 2022. 5. King, Ward and Raney, 1954, J. Lab. Clin. Med., 44:301. 6. Lowbury, 1951, J.Clin.Path., 4:66. 7. Lowbury and Collins ,1955, J.Clin. Pathol., 8:47. 8. Brown and Lowbury ,1965. .J. Clin. Pathol., 18: 752. 9. Murray, P.R, Baron.J.H., Pfaller M.A., Jorgensen, J.H and YolkenR.H (Ed.) 2003, Manual of Clinical Microbiology,8th Ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Goto, S. and Enomoto, S.,1970. Japan. J. Microbiol., 14; 65. 11. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition 12. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W.(2015)Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.