Carvão agar base frasco 500g

Ágar Base Carvão Uso pretendido: Recomendado para o cultivo de Bordetella pertussis, para a produção de vacinas e também para a manutenção de culturas de estoque. Composição** Ingredientes g / L HM infusion B a partir de 500g # 12.000 Peptona 10.000 Extrato de levedura 3.500 Amido solúvel 10.000 Carvão vegetal 4.000 Cloreto de sódio 5.000 Ágar 18.000 pH final (a 25°C) 7,3±0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho # Equivalente a infusão de coração de boi Instruções Suspenda 31,25 gramas em 450 ml de água purificada/destilada. Aqueça até a ebulição para dissolver completamente o meio. Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão (121 °C) por 15 minutos. Resfrie a 45-50° e adicione assepticamente 10% de sangue desfibrinado estéril e o conteúdo reidratado de um frasco de Bordetella Suplemento Seletivo (AG316). Para espécies de Haemophilus, o meio pode ser convertido em Ágar Chocolate. Princípio e interpretação O gênero Bordetella contém quatro espécies: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica e Bordetella avium (1). Estudos genéticos demonstraram que esses organismos estão intimamente relacionados entre si. Os seres humanos são os únicos hospedeiros da B. pertussis e da B. parapertussis, enquanto a B. bronchoseptica é encontrada em uma grande variedade de animais e, ocasionalmente, em seres humanos (2). A B. avium é encontrada em aves. As espécies de Bordetella são obrigatoriamente aeróbicas e metabolicamente não muito ativas. Elas não são móveis, exceto a B. bronchoseptica. A B. pertussis é a principal causa da coqueluche ou tosse convulsa. A B. parapertussis está associada a uma forma mais branda da doença (3). O isolamento primário da B. pertussis, em particular, requer a adição de carvão vegetal, 15-20% de sangue para neutralizar os efeitos inibidores do crescimento. O isolamento desse organismo requer um meio de enriquecimento. O Charcoal Agar é preparado de acordo com o método de Mishulow, Sharpe e Cohen (2). Esse meio pode ser usado como substituto do ágar Bordet-Gengou para o isolamento de B. pertussis e para a produção de vacinas contra B. pertussis. O Agar Base Carvão suplementado com sangue de cavalo também pode ser usado para o cultivo e o isolamento de Haemophilus influenzae (4). A dificuldade no isolamento da Bordetella pertussis das secreções nasofaríngeas é a repressão da flora indesejada durante o longo período de incubação em meios nutritivos. A penicilina pode ser adicionada ao meio como um agente antimicrobiano para restringir os outros contaminantes. No entanto, as floras resistentes à penicilina ainda causam contaminação, conforme observado por Lacey (4). A meticilina foi considerada superior à penicilina na supressão da flora nasofaríngea indesejada, conforme observado por Broome et al (5). Sutcliffe e Abbott descobriram que a cefalexina ainda era melhor do que a meticilina (6). Os ingredientes como HM infusion B (infusão de coração de boi), peptona e extrato de levedura fornecem nutrientes essenciais aos organismos. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O amido solúvel e o carvão vegetal neutralizam as substâncias tóxicas para as espécies de Bordetella, como os ácidos graxos. O carvão vegetal tem a tendência de se depositar no fundo do frasco. Portanto, antes de distribuir, agite os frascos suavemente para obter uma suspensão uniforme de carvão (7). Examine as placas após 40 horas de incubação e, depois disso, duas vezes por dia. Pequenas colônias brancas acinzentadas brilhantes, com cantos arredondados, de espécies de Bordetella são observadas nas placas. Confirme os achados com DFA, ou seja, teste de anticorpo fluorescente direto. Para fazer um diagnóstico precoce, realize o teste de anticorpos fluorescentes diretos na secreção. Tipo de amostra Swabs nasais Coleta e manuseio de amostras Colete os esfregaços nasais no estágio inicial da doença e coloque-os em tubos de ágar-ágar meio forte suplementado com 10% v/v de sangue de cavalo lisado e desfibrinado e Bordetella Suplemento Seletivo (AG316). Inocule generosamente os swabs em uma camada espessa de Agar Base Carvão contendo 10% v/v de sangue e Bordetella Suplemento Seletivo (AG316). Além disso, pode ser usado um meio não seletivo (sem suplemento). Recoloque o swab no meio de transporte original e mantenha-o em temperatura ambiente. Incube as placas a 35°C em uma atmosfera úmida (60-70% de umidade) por até 6 dias. Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Advertências e precauções Somente para uso em diagnóstico in vitro. Somente para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/roupa de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas microbiológicas de laboratório ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão, de acordo com as diretrizes estabelecidas, devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas nas fichas de dados de segurança individuais. Limitações 1. Agite o frasco suavemente ao dispensar para obter uma suspensão uniforme de carvão. 2. Confirme os resultados com o teste DFA (Anticorpos de Fluorescência Direta). Desempenho e avaliação O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções do rótulo e dentro do período de validade, quando armazenado na temperatura recomendada. Controle de Qualidade Aparência: Pó homogêneo de fluxo livre, de cor cinza a preto acinzentado Gelificação: firmeza comparável à do gel de ágar a 1,8% Cor e clareza do meio preparado: Gel opaco de cor preta com partículas pretas não dissolvidas em placas de Petri Reação: solução aquosa de 6,25% p/v a 25°C. pH: 7,3±0,2 pH 7,10-7,50 Resposta cultural Características culturais observadas com a adição de sangue desfibrinado estéril e do Bordetella Suplemento Seletivo (AG316), após uma incubação a 35 - 37°C por 24 - 48 horas Organismo: Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: bom – exuberante Recuperação: >=50% Organismo: Bordetella parapertussis ATCC 15311 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: bom – exuberante Recuperação: >=50% Organismo: Bordetella pertussis ATCC 8467 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: bom – exuberante Recuperação: >=50% Organismo: Staphylococcus aureus ATCC 25923 (00034*) Inóculo (CFU): >=10000 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% Organismo: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*) Inóculo (CFU): >=10000 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% * números WDCM correspondentes Armazenamento e prazo de validade Armazene entre 10 e 30 °C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2 e 8 °C. Use antes da data de validade indicada no rótulo. Após a abertura, o produto deve ser armazenado adequadamente e seco, depois de tampar bem o frasco, para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazene em uma área seca e ventilada, protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche bem o recipiente após o uso. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. Descarte O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e o material que entrar em contato com a amostra clínica deve ser descontaminado e descartado de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (8,9). Referências 1. Murray P. R., Baron J. H., Pfaller M. A., Jorgensen J. H. and Yolken R. H., (Ed.), 2003, Manual of Clinical Microbiology, 8th Ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Mishulow, Sharpe and Cohen, 1953, Am. J. Public Health, 43:1466. 3. Ensminger P. W., Gulberston C. G. and Powell H. M., 1953. J. Infect. Dis., 93(3):266. 4. Lacey B. W., 1954, J. Hyg., 59:273 5. Broome C. V., Fraser D. W. and English J. W., 1979, Internat. Symp. on Pertussis DHEW J., Washington D.C., pp 19-29. 6. Sutcliffe E. M. and Abbott J. D., 1979, B.M.J. II: 732-733. 7. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore. 8. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition. 9. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.