Carne cozida meio (rc meio) frasco 500g

MEIO CARNE COZIDA (RC MEDIUM) Uso pretendido: Recomendado para o cultivo de aeróbios e anaeróbios, especialmente Clostridia patogênica de amostras clínicas, de alimentos e de água. Também pode ser usado como meio de manutenção para culturas de estoque. Composição** Ingredientes g / L #Peptona HMH B - 98.000 Peptona de proteose - 20.000 Dextrose (glicose) - 2.000 Cloreto de sódio - 5.000 pH final (a 25°C) 7,2±0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho # Equivalente a coração bovino, sólidos Instruções: Suspenda 12,5 gramas em 100 ml de água purificada/destilada (ou suspenda 1,25 gramas em 10 ml de água destilada em tubos de ensaio). Misture bem e deixe repousar por 15 minutos até que todas as partículas estejam completamente úmidas. Distribua em tubos ou frascos conforme desejados. Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão (121°C) por 15 minutos. Princípio e interpretação: Clostridium é um grande gênero de anaeróbios gram-positivos portadores de esporos. Eles estão normalmente presentes no solo, alguns são responsáveis por doenças humanas e animais e outros estão associados à deterioração de alimentos. Eles podem ser sacarolíticos, decompondo açúcares para formar ácidos butírico e acético e álcoois. A peptona HMH no Robertson's Medium fica avermelhada e produz gás. Outras espécies proteolíticas atacam os aminoácidos. A peptona HMH no meio de Robertson é enegrecida e decomposta por espécies de Clostridium, dando à cultura um odor desagradável. Os anaeróbios mesófilos formadores de esporos são de importância primordial na deterioração de alimentos de baixa acidez embalados em recipientes selados, devido à sua alta resistência ao calor, sua capacidade de crescer na ausência de oxigênio e uma faixa de crescimento que abrange a temperatura de armazenamento normal de alimentos enlatados e outros alimentos processados, incluindo o armazenamento refrigerado de carnes curadas. O Meio de Carne Cozida foi originalmente desenvolvido por Robertson (1) para o cultivo de certos anaeróbios isolados de feridas. A formulação atual é uma modificação, também chamada de Chopped M-Medium (2), que suporta o crescimento de muitos anaeróbios estritos formadores de esporos e não formadores de esporos. Ela tem a capacidade de iniciar o crescimento de bactérias a partir de inóculos muito pequenos e de manter a viabilidade das culturas por um longo período. Culturas mistas de bactérias sobrevivem no Meio Carne Cozida sem deslocar os organismos de crescimento mais lento. Os produtos do crescimento não destroem rapidamente os organismos inoculados e, portanto, é um excelente meio para o armazenamento de organismos aeróbicos e anaeróbicos. É usado para cultivo e manutenção de Clostridia e para determinar a atividade proteolítica de anaeróbios (2,3). A FDA recomendou esse meio para enumeração e identificação de Clostridium perfringens em alimentos (4). O Meio Carne Cozida contém HMH peptona B, que fornece aminoácidos e outros nutrientes. Ele também contém glutationa, uma substância redutora que permite o crescimento de anaeróbios obrigatórios. Os grupos sulfidrila, que conferem efeito redutor, estão mais disponíveis na proteína desnaturada e, portanto, a carne cozida é adicionada ao meio. A adição de dextrose permite o crescimento rápido e intenso de bactérias anaeróbicas em um curto espaço de tempo e leva a uma identificação mais rápida de anaeróbios importantes. O crescimento nesse meio é indicado pela turbidez ou formação de bolhas por alguns organismos. O escurecimento e a desintegração das partículas de carne indicam proteólise. Para obter melhores resultados, o meio deve ser usado no dia em que for preparado; caso contrário, deve ser fervido ou cozido no vapor por alguns minutos e deixado esfriar sem agitação e, em seguida, inoculado. A inoculação deve ser feita perto do fundo do tubo nas partículas de carne para culturas anaeróbicas. Os aeróbios crescem na parte superior, enquanto as espécies mais anaeróbicas crescem mais profundamente no meio. Para o isolamento de Clostridium de alimentos, use um stomacher para preparar uma suspensão de 10% do alimento no diluente Água Peptona. Faça diluições e coloque as suspensões e as diluições em placas de Meio Base de Willis and Hobbs, Tryptose Sulphite Cycloserine (T.C.S.) Agar Base. Coloque um disco de metronidazol sobre o inóculo. Incubar anaerobicamente a 37°C durante a noite. Para contar os clostrídios, despeje as placas com as diluições em ágar base Perfringens (O.P.S.P.). Incube placas duplicadas aerobicamente e anaerobicamente para distinguir entre clostrídios e outros organismos. Adicione parte da suspensão a dois tubos de Meio Carne Cozida. Aqueça um tubo por 10 minutos a 80°C e incube como descrito acima. O crescimento de clostrídios é visualizado como turbidez ou bolhas de gás. Esse meio pode ser testado posteriormente quanto à presença de Clostridium (5). Tipo de amostra: Amostras clínicas - fezes, feridas, tecidos, pus etc.; amostras de alimentos e laticínios; amostras de água. Coleta e manuseio de espécimes: Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio de espécimes de acordo com as diretrizes estabelecidas (5,6). Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para a coleta e o processamento de amostras de acordo com as diretrizes (7,8). Para amostras de água, siga as técnicas apropriadas para a coleta e o processamento de amostras de acordo com as diretrizes e os padrões locais (9). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Advertências e precauções: Uso em diagnóstico in vitro. Somente para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção/roupa de proteção/proteção para os olhos/proteção facial. Siga as boas práticas microbiológicas de laboratório ao manusear amostras e culturas. As precauções padrão, de acordo com as diretrizes estabelecidas, devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas nas fichas de dados de segurança individuais. Limitações: Outros testes bioquímicos devem ser realizados para confirmação. Desempenho e avaliação: O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções do rótulo, dentro do período de validade, quando armazenado na temperatura recomendada. Controle de qualidade Aparência: Grânulos de cor marrom Cor e clareza do meio preparado: Cor âmbar média, sobrenadante claro a ligeiramente opalescente sobre grânulos insolúveis. Reação: Reação de 12,5% p/v de suspensão aquosa a 25°C. pH: 7,2±0,2 pH 7.00-7.40 Resposta cultural: Características culturais observadas após uma incubação a 35-37°C por 40-48 horas. Organismo: Clostridium botulinum ATCC 25763 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: Exuberante Organismo: Clostridium perfringens ATCC 12924 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: Exuberante Organismo: Clostridium sporogenes ATCC 11437 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: Exuberante Organismo: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: Exuberante Organismo: Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Inóculo (CFU): 50 – 100 Crescimento: Exuberante Legenda:(*) - Números WDCM correspondentes Armazenamento e prazo de validade: Armazene entre 10 e 30 °C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2 e 8 °C. Use antes da data de validade indicada no rótulo. Após a abertura, o produto deve ser armazenado adequadamente e seco, depois de tampar bem o frasco, para evitar a formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de grumos. Armazene em local seco e ventilado, protegido de temperaturas extremas e fontes de ignição. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. Descarte: O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e o material que entrar em contato com a amostra clínica deve ser descontaminado e descartado de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (5,6). Referências 1.Robertson, 1916, J. Pathol. Bacteriol., 20:327. 2.Murray P. R., Baron J. H., Pfaller M. A., Jorgensen J. H. and Yolken R. H., (Ed.), 2003, Manual of Clinical Microbiology, 8th Ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3.MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation - Cultivation - Identification - Maintenance of Medical bacteria, Vol. I, Williams & Wilkins, Baltimore. 4. U.S. Food and Drug Administration, 1984, Bacteriological Analytical Manual, 6th Ed., AOAC, Arlington, Va. Collins C. H., Lyne P. M., Grange J. M., 1985, 7th Ed., Microbiological Methods. 5.Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 2nd Edition. 6.Jorgensen,J.H., Pfaller , M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W.(2015)Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 7.American Public Health Association, Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 1978, 14thEd., Washington D.C. 8. Salfinger Y., and Tortorello M.L. Fifth (Ed.), 2015, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 5th Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 9.Lipps WC, Braun-Howland EB, Baxter TE,eds. Standard methods for the Examination of Water and Wastewater, 24th ed. Washington DC:APHA Press; 2023.