Caldo Mueller Kauffman Tetrationato Novobiocina Base ISO Frasco 500g

CALDO BASE TETRATIONATO NOVOBIOCINA MUELLER-KAUFFMAN Recomendado para melhorar o enriquecimento e o isolamento de Salmonellae. A composição e os critérios de desempenho desse meio de cultura estão de acordo com a especificação estabelecida nas normas ISO 6579-1:2017 e ISO 11133:2014 (E) /Amd.: 2020. COMPOSIÇÃO** Ingredientes (g/L) Digestão péptica de tecido animal: 4.300 Hidrolisado enzimático de caseína: 8.600 Bile de boi: 4.750 Cloreto de sódio: 2.600 Carbonato de cálcio: 38.700 Tiossulfato de sódio, penta-hidratado: 47.800 Verde brilhante: 0,0095 pH final (a 25°C): 8,2±0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho INSTRUÇÕES: Suspender 89,42g de meio desidratado em 1000mL de água destilada. Aqueça o meio apenas para ferver. NÃO AUTOCLAVE. Resfrie a 45°C-50°C e imediatamente antes de usar adicione assepticamente 20mL de solução de Iodo (20g de Iodo e 25g de Iodeto de Potássio em 100mL de água destilada estéril) juntamente com o conteúdo reidratado de 1 frasco de Suplemento de Novobiocina TTMK (FD203). Misture bem para dispersar o carbonato de cálcio uniformemente antes de dispensar em tubos estéreis. NOTA: Devido à presença de carbonato de cálcio, o meio preparado forma uma solução opalescente com precipitado branco. PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO: O exame de vários tipos de produtos alimentícios para Salmonella requer métodos diferentes daqueles usados em laboratórios clínicos. A necessidade de tal método é devido ao número baixo geralmente de Salmonellae nos alimentos e ao estado fisiológico frequentemente ruim desses patógenos após a exposição a condições estressantes durante o processamento ou armazenamento de alimentos. A Salmonella ferida é ressuscitada em meio de caldo não seletivo, o que facilita a detecção de Salmonella subletalmente ferida. O caldo de pré-enriquecimento ideal deve proporcionar a reparação de danos celulares, diluir substâncias tóxicas ou inibitórias e nutrientes suficientes para favorecer o crescimento de Salmonella. Na análise de alimentos para Salmonella, culturas de pré-enriquecimento são geralmente incubadas a 35°C -37°C por 18-24 horas e então uma porção é subcultivada em um ou mais caldos de enriquecimento seletivo. Normalmente 1mL de cultura de pré-enriquecimento é inoculado em 9mL de caldo de enriquecimento seletivo. O meio de enriquecimento seletivo contém ingredientes que permitem a proliferação de Salmonella e inibem o crescimento de microrganismos concorrentes diferentes de Salmonella. Caldo de Lactose (M1003) é recomendado pela BAM para pré-enriquecimento de Salmonella nos alimentos. O enriquecimento seletivo é feito no caldo tetrationato e no meio Rappaport Vassiliadis. Para a detecção de Salmonella de origem alimentar, várias modificações do caldo tetrationato geralmente encontraram aplicações mais amplas (7). Mueller (1) recomendou o caldo tetrationato como meio seletivo para o isolamento de Salmonella. Kauffman (2) modificou a fórmula para incluir bile de boi e verde brilhante como agentes seletivos para suprimir bactérias como as espécies Proteus. A Especificação Padrão Britânica qualifica o caldo verde brilhante de tetrationato para isolamento de Salmonella de carne e produtos à base de carne e de aves e produtos avícolas (3). É também um caldo seletivo recomendado para isolar Salmonella de fezes de animais e água poluída por esgoto (4). A seletividade é conferida pelo tetrationato (da reação do tiossulfato e iodo). O uso de mais de um caldo seletivo aumenta o isolamento de Salmonella de amostras com múltiplos sorotipos (5). Caldo Base Tetrationato Novobiocina Mueller-Kauffman contém hidrolisado enzimático de caseína e digestão péptica de tecido animal como fontes de carbono, nitrogênio, vitaminas e minerais. Bile de boi e verde brilhante adicionado são agentes seletivos, que inibem organismos gram-positivos e outros gram-negativos. O carbonato de cálcio é o tampão. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O tiossulfato de sódio é uma fonte de enxofre. Os ânions tetrationato (S4O6) constituem o principal agente seletivo nesses meios de enriquecimento. Se desejado, 4 mg de novobiocina por litro de caldo podem ser adicionados para suprimir as espécies de Proteus (6). Adicione aproximadamente 10g de amostra a 100mL de caldo. Agitar bem e colocar o frasco em banho-maria a 45°C por 15 minutos. Retirar os frascos e colocar em incubadora ou banho-maria a 43°C. Vários estudos mostraram maior recuperação de Salmonella após incubação de enriquecimento seletivo a 43°C (8). Após uma incubação de 18-24 horas e 48 horas, subcultura em Agar Verde Brilhante, Modificado (M016). Este meio não é adequado para o crescimento de Salmonella typhi, Salmonella sendai e Salmonella pullorum, etc. O meio completo é instável e deve ser usado imediatamente. Pode ser armazenado a 2-8°C no escuro por não mais de 7 dias. Organismos diferentes de Salmonellae, como Morganella morganii e algumas Enterobacteriaceae, podem crescer no meio. Portanto, testes confirmatórios devem ser realizados em todas as colônias presuntivas recuperadas de Salmonella. CONTROLE DE QUALIDADE Aparência: Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo esverdeado Cor e clareza do meio preparado: Forma-se solução opalescente de cor verde claro com precipitado pesado branco Reação: Reação de solução aquosa 8,93% p/v a 25°C. pH: 8,2±0,2 Teste de promoção de crescimento: A Promoção do Crescimento foi observada de acordo com a USP. Resposta cultural: M1496I: Características culturais observadas após incubação a 43°C por 18-48 horas com adição de 20mL de solução de iodo e Suplemento de Novobiocina TTMK (FD203), quando subcultivado em Ágar Digerido de Caseína de Soja (M290) Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 Inóculo: 50-100 Recuperação: Nada pobre Organismo: Proteus vulgaris ATCC 13315 Inóculo: 50-100 Recuperação: Nada pobre Organismo: Shigella flexneri ATCC 12022 Inóculo: >=10^3 Recuperação: Inibido Organismo: Salmonella Enteritidis ATCC 13076 Inóculo: 50-100 Recuperação: Excelente Organismo: Salmonella Paratyphi A ATCC 9150 Inóculo: 50-100 Recuperação: Excelente Organismo: Salmonella Paratyphi B ATCC 8759 Inóculo: 50-100 Recuperação: Excelente Organismo: Salmonella Typhi ATCC 6539 Inóculo: >=10^3 Recuperação: Inibido Organismo: Salmonella Typhimurium excellent ATCC 14028 Inóculo: 50-100 Recuperação: Excelente ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE Armazene abaixo de 30°C em recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C - 8°C. Use antes da data de validade no rótulo. REFERÊNCIAS 1. Mueller L., 1923, C. R. Soc. Biol., (Paris) 89:434. 2. Kauffman F., 1935, Ztschr. F. Hyg., 117:26. 3. International Organization for Standardization, 1974, (Draft International Standard ISO/DIS 3565), Geneva, Switzerland. 4. Public Health Laboratory Service, 1974, Monograph Series No.8, Public Health Laboratory Service, London, England. 5. Harvey R. W. S. and Price T. S., 1976, J. Hyg. Camb., 77:333. 6. Jeffries L., 1959, J. Clin. Pathol., 12:568. 7. Speck M. L., (Ed.), 1984, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 2nd Ed., American Public Health Association, Washington, D.C. 8. DAoust J. Y., 1989, Salmonella in Food borne Bacterial pathogens, (Eds.) Doyle M. P., 327, Marcel Dekker, New York.