Bismuto sulfito agar frasco 500g

ÁGAR SULFITO DE BISMUTO (SB) - M027 USO PRETENDIDO Recomendado para isolamento seletivo e contagem de espécies de Salmonella de amostras de alimentos. A composição e os critérios de desempenho deste meio estão de acordo com as especificações estabelecidas na ISO 6579-1:2017. COMPOSIÇÃO ** Ágar Sulfito de Bismuto (SB) Ingredientes (g/L) Peptona# : 10.000 Extrato HM ## : 5.000 Dextrose (Glicose): 5.000 Hidrogenofosfato dissódico, anidro : 4.000 Sulfato ferroso, anidro : 0.300 Indicador sulfito de bismuto: 8.000 Verde brilhante : 0.025 Ágar: 20.000 pH final (a 25°C) : 7.7 ±0.2 **Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho # Equivalente à digestão enzimática de tecidos animais ## Equivalente a estrato de carne Especificação ISO 6579-1 - Ágar Sulfito de Bismuto Ingredientes (g/L) Digestão enzimática de tecidos animais : 10.000 Extrato de carne : 5.000 Dextrose : 5.000 Hidrogenofosfato dissódico, anidro : 4.000 Sulfato ferroso, anidro : 0.300 Indicador sulfito de bismuto : 8.000 Verde brilhante: 0.025 Ágar : 20.000 pH final (a 25°C) : 7.7 ±0.2 INSTRUÇÕES Suspender 52,33g em 1000mL de água purificada/destilada. Aqueça até fervura para dissolver o meio completamente. NÃO ESTERILIZE EM AUTOCLAVE ou por esterilização fracionada, pois o superaquecimento pode destruir a seletividade do médio. A sensibilidade do meio depende em grande parte da dispersão uniforme do sulfito de bismuto precipitado no gel final, que deve ser disperso antes de despejar em placas de Petri estéreis. PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO Salmonellae constitue o grupo de bactérias taxonomicamente mais complexo entre as Enterobacteriaceae (1). As infecções humanas por Salmonella são mais comumente causadas pela ingestão de alimentos, água ou leite contaminados por excrementos humanos ou animais. Os seres humanos são os únicos reservatórios de S. Typhi (2). Dos vários meios empregados para o isolamento e identificação preliminar de Salmonellae, particularmente Salmonella Typhi; O Ágar Sulfito de Bismuto é o mais produtivo. O Ágar Sulfito de Bismuto é uma modificação do meio original de Wilson e Blair (3-5). Também é recomendado por várias Associações (2,6-8) para o isolamento e identificação preliminar de Salmonella Typhi e outras Salmonellae de materiais patológicos, esgotos, água, alimentos e outros produtos. O Bismuto Sulfito Agar (M027I) é recomendado para isolamento seletivo e enumeração de espécies de Salmonella de acordo com o Comitê ISO (8). S. Typhi, S. Enteritidis e S. Typhimurium normalmente crescem como colônias pretas com ou sem um brilho metálico circundante resultante da produção de sulfeto de hidrogênio e redução de sulfito a sulfeto férrico preto. Salmonella Paratyphi cresce como colônias verdes claras. O Ágar Sulfito de Bismuto pode inibir algumas cepas de espécies de Salmonella e, portanto, não deve ser usado como o único meio seletivo para esses organismos. Além disso, este meio favorece o uso de inóculo maior em comparação com outros meios seletivos, pois possui ação inibitória única contra organismos gram-positivos e coliformes. Salmonella Paratyphi Cresce como colônias verdes claras. O Bismuto Sulfito Agar pode inibir algumas cepas de espécies de Salmonella e, portanto, não deve ser usado como o único meio seletivo para esses organismos. Além disso, este meio favorece o uso de inóculo maior em comparação com outros meios seletivos, pois possui ação inibitória única contra organismos gram-positivos e coliformes. Peptona e extrato HM servem como fontes de carbono, nitrogênio, aminoácidos de cadeia longa, vitaminas e fatores de crescimento essenciais. A dextrose é a fonte de carbono. O fosfato dissódico mantém o equilíbrio osmótico. O indicador sulfito de bismuto junto com o verde brilhante inibem as bactérias intestinais gram-positivas e gram-negativas e o sulfato ferroso auxilia na detecção da produção de sulfeto de hidrogênio. No caso de amostras de alimentos, pré-enriquecimento da amostra é feita antes da inoculação. TIPO DE AMOSTRA Amostras clínicas - fezes, amostras de alimentos e carne, leite e derivados, ração animal, fezes de animais, amostras ambientais. COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Processamento: (8) Pré-enriquecimento: As amostras (25g em 225mL) são pré-enriquecidas em Água Peptona Tamponada (M1494I) e incubadas a 34°C a 38°C por 18 h ± 2 horas. Enriquecimento seletivo: 0,1mL de amostra pré-enriquecida é inoculado em 10mL de Caldo RVS (M1448I) ou Ágar MSRV (M1428) e incubado a 41,5 ± 1°C por 24 ± 3 horas e 1mL de cultura é inoculado em caldo MKTT (M1496I) e incubado a 37± 1°C por 24 ± 3 horas. No caso de Salmonella Typhi e Salmonella Paratyphi, é realizado um enriquecimento seletivo em caldo Selenito Cistina e então incubados a 37± 1°C por 24 h ± 3 h e 48 h ± 3 h. Isolamento: A cultura obtida é então semeada em Ágar Sulfito de Bismuto (BS) (M027) e incubada a 37± 1°C por 24 ± 3 horas. Recomenda-se uma incubação adicional de 24 ± 3 horas. Simultaneamente, é realizado o plaqueamento em ágar de isolamento Ágar XLD, Modificado (M031I). Confirmação: Testes bioquímicos e sorológicos são realizados para confirmação. Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para manuseio de amostras de acordo com as diretrizes estabelecidas (7,10). AVISO E PRECAUÇÕES Uso para diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use proteção; luvas/vestuário de proteção/proteção ocular/proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear espécimes e culturas. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio das amostras. As orientações de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. NÃO AUTOCLAVE NEM SUPERAQUEÇA O MEIO, pois isso destrói a seletividade do meio. 2. S.Typhi e S.Arizonae exibem típicas colônias marrons, com ou sem brilho metálico. 3. Este meio é altamente seletivo e deve ser utilizado em paralelo com meios menos seletivos para isolamento. 4. Com certas espécies de Salmonella, colônias pretas típicas com brilho metálico são observadas perto de inoculação pesada e colônias isoladas podem apresentar colônias verdes. 5. Organismos individuais diferem em suas necessidades de crescimento e podem apresentar padrões de crescimento variáveis no meio. DESEMPENHO E AVALIAÇÃO O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com as instruções no rótulo dentro do período de validade quando armazenado na temperatura recomendada. CONTROLE DE QUALIDADE Aparência Pó homogêneo de fluxo livre de amarelo claro a amarelo esverdeado. Gelificação Firme, comparável com gel de ágar a 2% Cor e clareza do meio preparado Amarelo esverdeado, opalescente com forma de precipitado floculento em placas de Petri. Reação Reação de 5.23% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7.7 ±0.2 pH 7.50 - 7.90 RESPOSTA CULTURAL Foi observada após incubação a 37 ± 1°C por 24 ± 3 horas. As placas são ainda incubadas para mais 24 ± 3 horas. A taxa de recuperação é considerada como 100% para o crescimento de bactérias no Ágar Digestão Caseína de Soja. PRODUTIVIDADE Organismo : Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*) Inóculo(UFC) : 50-100 Crescimento : Bom Recuperação : >=50% Cor da colônia : Colônias marrons, cinzas ou pretas geralmente com um brilho metálico após 24 horas tornando-se uniformemente preto após 48 horas. Organismo : Salmonella Enteritidis ATCC 13076 (00030*) Inóculo(UFC) : 50-100 Crescimento : Bom Recuperação : >=50% Cor da colônia : Colônias marrons, cinzas ou pretas geralmente com um brilho metálico após 24 horas tornando-se uniformemente preto após 48 horas. Organismo : Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inóculo(UFC) : >=10^4 Crescimento : Crescimento ou inibição parcial Recuperação : - Cor da colônia : Colônias verdes opacas ou marrons sem brilho metálico Organismo : Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inóculo(UFC) : >=10^4 Crescimento : Crescimento ou inibição parcial Recuperação : - Cor da colônia : Colônias verdes opacas ou marrons sem brilho metálico SELETIVIDADE Organismo : Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) Inóculo(UFC) : >=10^4 Crescimento : Inibido Recuperação : 0% Cor da colônia : - Organismo : Enterococcus faecalis ATCC 19433 (00009*) Inóculo(UFC) : >=10^4 Crescimento : Inibido Recuperação : 0% Cor da colônia : - TESTES ADICIONAIS Organismo : Salmonella Typhi ATCC 6539 Inóculo(UFC) : 50 -100 Crescimento : Bom Recuperação : >=50 % Cor da colônia : Colônias marrons, cinzas ou pretas geralmente com um brilho metálico após 24 horas tornando-se uniformemente preto após 48 horas Organismo : Salmonella Paratyphi A ATCC 9150 Inóculo(UFC) : 50 -100 Crescimento : Bom Recuperação : >=50 % Cor da colônia : Colônias marrons, cinzas ou pretas geralmente com um brilho metálico após 24 horas tornando-se uniformemente preto após 48 horas Chave: *Números WDCM correspondentes ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL Armazenar entre 10°C e 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 20°C e 30° C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DISPOSIÇÃO O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (7,9). REFERÊNCIAS 1. Tindall B. J., Crimont P. A. D., Gorrity G. M., EUZESY B. P., 2005, Int. J. Sys. Evol. Microbiol.,55:521. 2. Baird R.B., Eaton A.D., and Rice E.W., (Eds.), 2015, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 23rd ed., APHA, Washington, D.C. 3. Wilson and Blair, 1926, J. Pathol. Bateriol., 29:310. 4. Wilson and Blair, 1927, J. Hyg., 26:374. 5. Wilson and Blair, 1931, J. Hyg., 31:138. 6. FDA Bacteriological Analytical Manual, 2005, 18th Ed., AOAC, Washington, D.C. 7. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 8. Microbiobiology of the food chain- Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping of Salmonella- Part I Detection of Salmonella . International Organization for Standardization (ISO), ISO/ DIS 6579-1:2017. 9. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handb0ook. 2nd Edition.