Agar cromogênico listeria base iso 11290-1 500g

ÁGAR BASE CROMOGÊNICO LISTERIA OTTAVIANI-AGOSTI - M1540I USO PRETENDIDO Recomendado para o isolamento seletivo e diferencial de Listeria monocytogenes. A composição e os critérios de desempenho deste meio estão de acordo com a especificação estabelecida na ISO 11290-1:2017 e ISO 11290-2:2017. COMPOSIÇÃO ** M1540I HiCromeTM Ágar Base Listeria Ottaviani-Agosti Ingredientes (g/L) HM Peptona#: 18.000 Triptona##: 6.000 Extrato de levedura: 10.000 Piruvato de sódio: 2.000 Glicose(Dextrose): 2.000 Glicerofosfato de magnésio: 1.000 Sulfato de Magnésio: 0.500 Cloreto de Sódio: 5.000 Cloreto de lítio: 10.000 Hidrogenofosfato dissódico: 2.500 5-Bromo-4 cloro-3-indolil--D-glicopiranosídeo: 0.050 Ágar: 15.000 pH final (a 25°C): 7.2 ±0.2 **Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho # - Equivalente à digestão enzimática de tecidos animais, ## - Equivalente à digestão enzimática de caseína Suplementos: FD212A - 2 Frascos (mg/Frasco) Sal sódico do ácido nalidíxico: 10.000 Ceftazidima: 10.000 Sulfato de polimixina B: 38350 IU Anfotericina B: 5.000 FD214 - 2 Frascos (g/Frasco) Suplemento de Enriquecimento L. mono I: 1.000 Especificações ISO 11290 - Ágar Listeria de acordo com Ottaviani e Agosti Ingredientes (g/L) Digestão enzimática de tecidos animais: 18.000 Digestão enzimática de caseína: 6.000 Estrato de levedura: 10.000 Piruvato de sódio: 2.000 Glicose: 2.000 Glicerofosfato de magnésio: 1.000 Sulfato de magnésio (Anidro): 0.500 Cloreto de Sódio: 5.000 Cloreto de lítio: (10.000) Hidrogenofosfato dissódico(Anidro): 2.500 5-Bromo-4 cloro-3-indolil--D-glicopiranosídeo: 0.050 Ágar: 12.000 - 18.000 pH final (após a esterilização): 7.2 ±0.2 Suplementos (g/L) I Sal sódico do ácido nalidíxico: 0.020 Ceftazidima: 0.020 Sulfato de polimixina B: 76.700 IU Cicloheximida OR: 0.050 Anfotericina B: 0.010 II L--fosfatidilinositol: 2.000 INSTRUÇÕES Suspenda 36,02g em 465mL de água purificada/destilada. Aqueça até a fervura para dissolver o meio completamente. Esterilizar em autoclave a 15 lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Esfriar de 45°C a 50°C. Adicione assepticamente o conteúdo estéril de 1 frasco de Suplemento de Enriquecimento L. mono I (FD214) e o conteúdo reidratado estéril de Suplemento Seletivo Listeria OA (FD212A). Misturar bem e despeje em placas de Petri estéreis. PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO Listeria monocytogenes é um patógeno humano gram-positivo de origem alimentar responsável por infecções graves em gestantes. Mulheres que podem resultar em aborto, natimorto, nascimento de uma criança com listeriose neonatal e meningite ou bacteremia em adultos e juvenis. A patogenicidade de Listeria ivanovii para humanos é incerta. Uma vez que L. monocytogenes e L. innocua possuem propriedades bioquímicas semelhantes, não podendo ser diferenciadas em meios tradicionais (PALCAM, Oxford). O meio é baseado na formulação de Ottoviani e Agosti (3,4) para o isolamento seletivo e diferencial de Listeria monocytogenes de alimentos e rações para animais que é adotado pelo Comitê ISO (5,6). HM peptona, triptona e extrato de levedura fornecem compostos nitrogenados e carbonáceos, aminoácidos de cadeia longa, vitaminas e outros nutrientes essenciais. O piruvato de sódio fornece nutrientes essenciais para o crescimento. A glicose (Dextrose) é o carboidrato fermentável. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O fosfato tampona o meio. Cloreto de lítio e suplementos seletivos (FD212A) adicionados inibem a microflora acompanhante e permitem o crescimento de espécies de Listeria. Espécies de Listeria hidrolisam o substrato cromogênico (5-Bromo-4 cloro-3-indolil--D-glucopiranosídeo) que produz colônias coloridas de azul a verde. A diferenciação de Listeria monocytogenes de outras espécies de Listeria é baseada na atividade da fosfolipase C (PIPLC) específica de fosfatidilinoitol. A enzima fosfolipase C hidrolisa o substrato purificado (FD214) adicionado ao meio resultando em um halo opaco ao redor das colônias de Listeria monocytogenes. TIPO DE ESPÉCIME Amostras clínicas - Amostra de Sangue; Alimentos e rações para animais, amostras ambientais na área de fabricação e manipulação de alimentos COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS Para amostras clínicas, seguir as técnicas adequadas de coleta das amostras, processando conforme as diretrizes (1,2). Para alimentos e rações para animais, as amostras ambientais seguem técnicas apropriadas de manuseio de amostras conforme diretrizes estabelecidas (5,6). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. AVISO E PRECAUÇÕES Uso para diagnóstico In Vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção de olhos / proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais. LIMITAÇÕES 1. Algumas cepas de L.monocytogenes expostas a condições de estresse, particularmente estresse ácido, podem apresentar um halo muito fraco (ou mesmo sem auréola). 2. Mais testes bioquímicos devem ser realizados para diferenciar entre L.monocytogenes e L. ivanovii, pois ambos apresentam halo opaco da atividade PIPLC. 3. Alguns organismos diferentes de Listeria spp. também pode produzir colônias azuis neste meio, portanto, a caracterização bioquímica é necessária para a diferenciação.. CONTROLE DE QUALIDADE Aparência: Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo Gelificação: Firme, comparável com o gel de ágar a 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Formas de gel opalescente de cor âmbar clara em placas de Petri Reação: Reação de 7.02% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 7.2 ±0.2 pH: 7.00 - 7.40 Resposta cultural: Características culturais observadas com adição de suplemento seletivo de Listeria OA (FD212A) estéril e enriquecimento de L.mono suplemento I (FD214) após uma incubação de 48 ± 4 horas a 37°C ± 1°C. Produtividade Organismos: Listeria monocytogenes ATCC 13932 (00021*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da colônia: Azul-esverdeado Atividade PIPLC: Positivo - Halo opaco ao redor da colônia exibindo fosfatidilinositol, específico de atividade fosfolipase Organismos: Listeria monocytogenes ATCC 35152 (00109*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da colônia: Azul-esverdeado Atividade PIPLC: Positivo - Halo opaco ao redor da colônia exibindo fosfatidilinositol, específico de atividade fosfolipase Especificidade Organismos: Listeria innocua ATCC 33090 (00017*) Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: - Cor da colônia: Azul-esverdeado Atividade PIPLC: Negativo Seletividade Organismos: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% Cor da colônia: - Atividade PIPLC: - Organismos: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% Cor da colônia: - Atividade PIPLC: - Organismos: Enterococcus faecalis ATCC 19433 (00009*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% Cor da colônia: - Atividade PIPLC: - Organismos: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) Inóculo(UFC): >=10^4 Crescimento: Inibido Recuperação: 0% Cor da colônia: - Atividade PIPLC: - Teste Microbiológico Adicional Organismos: Listeria ivanovii ATCC 19119 Inóculo(UFC): 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da colônia: Azul-esverdeado Atividade PIPLC: Positivo - Halo opaco ao redor da colônia exibindo fosfatidilinositol, específico de atividade fosfolipase Chave: * Números WDCM correspondentes ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL Armazenar entre 15°C e 25°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C e 8° C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado. DISPOSIÇÃO O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais vigentes (1,2). REFERÊNCIAS 1. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition. 2. Jorgensen, J.H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W. (2015) Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1. 3. Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 a), Industrie Alimentari 36, 1-3 4. Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 b), Quimper Froid Symposium Proceedings p. 6, A.D.R.I.A. Quimper, France, 16-18 June 1997. 5. Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of Listeria spp. - Part 1 , Detection method ; ISO 11290-1:2017 6. Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of Listeria spp. - Part 2 , Enumeration method ; ISO 11290-2:2017