Agar base Bacillus cereus (MYP) frasco 500g

ÁGAR BASE SELETIVO BACILLUS CEREUS (MYP) ISO - M1139I USO RECOMENDADO É usado para isolamento e identificação de espécies de Bacillus e Staphylococcus patogênicos. A composição e os critérios de desempenho deste meio estão de acordo com as especificações estabelecidas na ISO 7932: 2004. Composição** Ingredientes Gms / Litro Digestão enzimática de caseína 10.000 Extrato de carne 1.000 D-Manitol 10.000 Cloreto de sódio 10.000 Vermelho de fenol 0,025 Ágar 15.000 pH final (a 25°C) 7,2±0,2 **Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho Instruções: Suspenda 46,03 gramas em 900 ml de água destilada. Aqueça até a ebulição para dissolver o meio completamente. Esterilize em autoclave a 15 libras de pressão (121°C) por 15 minutos. Arrefecer a 45-50°C. Adicionar assepticamente o conteúdo reidratado de 2 frascos de solução estéril de sulfato de polimixina B (FD003) e 100 ml de Emulsão de Gema de Ovo estéril (FD045). Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis. Princípio e Interpretação A atividade da lecitinase é a reação chave na identificação diferencial de B.cereus, a espécie mais comumente encontrada e importante em laboratórios clínicos, da maioria das outras espécies de Bacillus. Se o isolado desconhecido produzir lecitinase, Bacillus cereus pode ser presumivelmente identificado também observando a morfologia colonial, reatividade hemolítica e testes de motilidade. Quando presente em grande número em certos alimentos, o B. cereus pode produzir metabólitos responsáveis pelos sintomas clínicos de intoxicação alimentar (3). Este meio diferencia B.cereus de outras bactérias com base na atividade da lecitinase, fermentação do manitol e resistência à polimixina (FD003) (4, 5). Bacillus cereus Selective Agar Base é recomendado pelo comitê ISO para a enumeração de Bacillus cereus (9). O Bacillus cereus está ubiquamente presente no solo, na água da vegetação e na poeira. Foi isolado de uma grande variedade de alimentos, incluindo vegetais, carnes, cereais, leite fresco pasteurizado e leite em pó (1, 2, 6) e alimentos processados. Em condições favoráveis, o organismo se multiplica e causa doenças gastrointestinais (6). Está implicado em duas formas diferentes de intoxicação alimentar; uma doença emética e uma doença diarreica. A doença emética é mediada por uma toxina altamente estável que sobrevive a altas temperaturas, exposição a tripsina, pepsina e pH extremos. A doença diarreica é mediada por uma enterotoxina lábil ao calor e ao ácido. Contém digestão enzimática de caseína e extrato de carne, que fornecem fonte de nitrogênio. A fermentação do manitol pode ser detectada pelo vermelho de fenol, que dá cor amarela às colônias fermentadoras do manitol devido à produção de ácido. A emulsão de gema de ovo adicionada ajuda na diferenciação de colônias produtoras de lecitinase, que são cercadas por uma zona de precipitado branco. A adição de sulfato de polimixina B (FD003) ajuda a restringir o crescimento de bactérias gram-negativas, como Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Esses meios de diferenciação permitem a diferenciação de B.cereus de outras espécies de Bacillus por sua incapacidade de fermentar manitol e esporulação pobre. B.cereus dissimula a gema do ovo e dá origem a colônias típicas de bacilos com zonas avermelhadas e halos brancos. Ácido produzido por outros organismos que não B.cereus muitas vezes se difundem através do meio, tornando difícil distinguir entre fermentadores de manitol e não fermentadores. Portanto, é aconselhável transferir as colônias suspeitas para um meio fresco para visualizar a verdadeira reação. Controle de qualidade: Aparência: Pó de fluxo livre homogêneo de amarelo claro a roxo rosado Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar 1,5% Cor e clareza do meio preparado: Meio basal: Gel de cor vermelha transparente a ligeiramente opalescente. Após adição de emulsão de gema de ovo (FD045): Forma-se gel opaco de cor laranja claro em placas de Petri Reação: Reação de solução aquosa a 4,6% p/v a 25°C. pH: 7,2±0,2 pH 7,0-7,40 Resposta cultural: Características culturais observadas com adição de Emulsão de Gema de Ovo (FD045) e Sulfato de Polimixina B (FD003) após uma incubação a 30±2°C por 18-48 horas. Resposta cultural Organismo Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia Lecitinase atividade Bacillus cereus 50-100 luxuriant >=50% red positive, opaque ATCC 10876 zone around the colony Bacillus subtilis 50-100 luxuriant >=50% yellow negative ATCC 6633 Escherichia coli ATCC 50-100 none-poor <=10% Negative 25922 Proteus mirabilis ATCC 50-100 luxuriant >=50% red Negative 25933 Pseudomonas aeruginosa 50-100 none-poor <=10% Negative ATCC 27853 Staphylococcus aureus 50-100 luxuriant >=50% yellow positive, opaque ATCC 25923 zone around the colony Armazenamento e vida útil: Armazenar abaixo de 30°C em recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8°C. Use antes da data de validade no rótulo Reference 1.Bergdoll M. S., 1981, Clin. Microbiol. Newsletter 3: 85-87. 2.Centers for Disease Control: Bacillus cereus- Maine, MMWR, 35: 408-410, 1986. 3.Mossel D. A. A., Koopman M. J. and Jongerium E., 1967, Appl. Microbiol, 15:650. 4.Downes F. P. and Ito K., (Eds.), 2001, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 4th Ed., APHA, Washington, D.C. 5.Nygren B., 1962, Acta Path. Microbiol. Scand., 56: Suppl. 1. 6.Donovan K. O., 1958, J. Appl. Bacteriol., 21:100. 7.Colimer A. R., 1948, J. Bacteriol., 55:777. 8.Rhodehamel J. and Harmon S. M., 1995, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8th Ed., AOAC International, Gaithersburg, Md. 9.International Organization for Standardization (ISO),7932:2004.Microbiology of food and animal feeding stuffs-Horizontal method for enumeration of presumptive Bacillus cereus-colony count technique at 30°C.