Agar Baird-Parker base frasco 500g

O Ágar Base Baird-Parker é recomendado para o isolamento e enumeração de estafilococos coagulase positiva de alimentos e amostras clínicas. Composição** Ingredientes Gms / Litro Triptona 10.000 HM Peptona B # 5.000 Extrato de Levedura 1.000 Glicina 12.000 Puruvato de Sódio 10.000 Cloreto de Lítio 5.000 Ágar 20.000 PH final (a 25 ° C) 7,0 ± 0,2 ** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho. # - Equivalente ao extrato de carne bovina Preparo: Suspenda 63 gramas em 950ml de água destilada. Aqueça o meio até obter fervura e dissolvê-lo completamente. Esterilizar por autoclavagem a 121ºC por 15 minutos. Resfriar até 50°C. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis. *Podem ser adicionados suplementos se necessário.* Princípio e Interpretação: O Ágar Base Baird-Parker foi desenvolvido por Baird Parker (4,5) a partir da formulação Tellurite-glicina de Zebovitz et al (16) para isolamento e enumeração de Staphylococcus em alimentos e outros materiais, pois permite uma boa diferenciação de cepas positivas de coagulase. Foi encontrada uma alta correlação entre o teste da coagulase e a presença de clara zona de lipólise neste meio, devido à lecitinase dos estafilococos que decompõem a gema do ovo. Por outro lado, estudos mostram que quase 100% dos estafilococos coagulase positivos são capazes de reduzir o telurito, que produz colônias negras, enquanto outros estafilococos nem sempre conseguem fazer isso. Verificou-se que o meio é menos inibidor do Staphylococcus aureus do que outros meios ao mesmo tempo, sendo mais seletivo (2,3,13). Posteriormente, o uso do ágar Baird-Parker foi oficialmente adotado pela AOAC International (7) e é recomendado na USP para uso na realização de testes de limite microbiano (14). Recentemente, o comitê ISO também recomendou este meio para o isolamento e enumeração de estafilococos (8). A identidade de Staphylococcus aureus isolada no ágar Baird-Parker deve ser confirmada com uma reação coagulase. O Agar Baird-Parker também pode ser usado para detectar a atividade da coagulase adicionando plasma de fibrinogênio (6). Suplemento de inibidor de tripsina de fibrinogênio no plasma (FD195) dissolvido em 10 ml de água destilada estéril adicionada a 90 ml de meio fundido estéril, mantido a 45-50°C. Neste meio, as colônias positivas da coagulase aparecem de branco a preto-acinzentado, cercadas por uma zona opaca devido à atividade da coagulase dentro de 24-48 horas de incubação a 35°C. A redução do telurito é necessária devido à ausência de emulsão de gema de ovo. Isso resulta em ágar translúcido e colônias de Staphylococcus de cor branca a cinza. Para resultados quantitativos, selecione 20-200 colônias. Conte Staphylococcus aureus como colônias e teste-as quanto à reação da coagulase. Relate Staphylococcus aureus por grama de alimento. Smith e Baird-Parker (12) descobriram que a adição de 50 mg / l de sulfametazina no meio suprime o crescimento e o enxame de espécies de Proteus. O Triptone, HM peptona B e extrato de levedura são fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas. O piruvato de sódio não apenas protege as células lesadas e ajuda na recuperação, mas também estimula o crescimento do Staphylococcus aureus sem destruir a seletividade. O cloreto de lítio e o telurito de potássio inibem a maior parte da microflora contaminante, exceto Staphylococcus aureus. O aditivo telurito é tóxico para outras estirpes de remoção de gema de ovo que não sejam S.aureus e confere uma cor preta às colônias. Glicina, piruvato aumenta o crescimento de Staphylococcus. Com a adição de gema de ovo, o meio fica amarelo, opaco.O aditivo de gema de ovo, além de fornecer enriquecimento, auxilia no processo de identificação, demonstrando a lecitinase atividade (reação da gema de ovo). Uma zona clara e colônias cinza-preto neste meio são diagnósticas para coagulase positiva Estafilococos. Após uma incubação adicional, uma zona opaca é desenvolvida ao redor das colônias, o que pode ser devido à atividade lipolítica. Ao testar o meio, inocule o material a ser examinado (0,1 ml por placa de diâmetro 90-100 mm), incube a 37°C e faça a primeira leitura após 24 a 26 horas. As colônias de Staphylococcus aureus são pretas e brilhantes, com um branco fino borda, cercada por uma zona clara. Incubar a 37°C por mais 24 horas e realizar o teste de coagulase nas colônias com as características acima, que se desenvolveram durante o período de incubação adicional. As placas devem ser usadas no mesmo dia preparação ou dentro de 48 horas, para evitar a perda de definição nas zonas precipitadas. O meio basal, sem a gema de ovo ou o telurito, é perfeitamente estável. Colônias de alguns organismos contaminantes podem digerir a reação do coagulase halo. Outras bactérias podem crescer neste meio, mas o teste bioquímico diferencia os estafilococos coagulase positivos dos outros organismos. Tipo de amostra Amostras clínicas: Pus, sangue; Amostras de alimentos; Amostras farmacêuticas. Coleta e manuseio de amostras Para amostras clínicas, siga as técnicas apropriadas para o manuseio das amostras, de acordo com as diretrizes estabelecidas (9,10). Para amostras de alimentos e laticínios, siga as técnicas apropriadas para coleta e processamento de amostras, de acordo com as diretrizes (1,11,15). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados. Aviso e Precauções Apenas para diagnóstico in vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção para os olhos / proteção para o rosto. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. As precauções padrão, de acordo com as diretrizes estabelecidas, devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas nas fichas de dados de segurança individuais. Limitações 1. Embora o meio seja recomendado para a detecção de Staphylococcus aureus coagulase positivo, outras bactérias podem crescer. 2. Mais testes bioquímicos devem ser realizados para confirmação. Desempenho e Avaliação A performance do meio é esperada quando usada de acordo com a direção na etiqueta dentro do prazo de validade, quando armazenada na temperatura recomendada. Controle de qualidade: Aparência: Creme para amarelar pó homogêneo de fluxo livre Gelificação: Firme, comparável ao gel de ágar a 2,0%. Cor e clareza do meio preparado: Meio basal: Gel de cor amarela clara a levemente opalescente. Após adição de emulsão e telurito de gema de ovo Emulsão: Forma de gel opaco de cor amarela em placas de Petri. Reação: Reação de solução aquosa de 6,3% p / v a 25 ° C. pH: 7,0 ± 0,2 pH: 6,80-7,20 Resposta Cultural: A resposta cultural foi observada após uma incubação a 35-37°C por 24-48 horas. A taxa de recuperação é considerada 100% para crescimento de bactérias no ágar de digestão de caseína de soja. Resposta Cultural Organismo: Estafilococcos aureus ATCC 6538 (00032*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Cinza-Preto Brilhante Lecitinase: Zona Positiva e Opaca ao redor da Colônia Organismo: Estafilococos aureus ATCC 25923 (00034*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Cinza-Preto Brilhante Lecitinase: Zona positiva e Opaca ao redor da Colônia Organismo: Proteus mirabilis ATCC 25933 Inoculação: 50-100 Crescimento: Bom-Exuberante Recuperação: >=50% Cor da Colônia: Marrom-Preto Lecitinase: Negativo Organismo: Micrococcus luteus ATCC 10240 Inoculação: 50-100 Crescimento: Pobre-BOm Recuperação: 30-40% Cor da Colônia: tons de marrom-preto (muito pequeno) Lecitinase: Negativo Organismo: Estafilococos epidermidis ATCC 12228 (00036*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Pobre-Bom Recuperação: 30-40% Cor da Colônia: Preto Lecitinase: Negativo Organismo: Bacillus subtilis ATCC 6633 (00003*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum-Pobre Recuperação: 0-10% Cor da Colônia: Marrom-Preto Mate Lecitinase: Negativo Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum-Pobre Recuperação: 0-10% Cor da Colônia: Grande Preto-Marrom Lecitinase: Negativo Organismo: Escherichia coli ATCC 8739 (00012*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum-Pobre Recuperação: 0-10% Cor da Colônia: Grande Preto-Marrom Lecitinase: Negativo Organismo: Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) Inoculação: 50-100 Crescimento: Nenhum-Pobre Recuperação: 0-10% Cor da Colônia: Grande Preto-Marrom Lecitinase: Negativo Chave: * Números correspondentes do WDCM. Armazenamento e prazo de validade: Armazenar abaixo de 30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8°C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, após fechar bem o frasco para evitar a formação de caroços devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada seca e protegida de temperaturas extremas e fontes de calor. Fechar o recipiente firmemente após o uso. Use antes da data de validade no rótulo. Descarte: O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e/ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Siga os procedimentos laboratoriais estabelecidos no descarte de materiais potencialmente contaminados de acordo com as técnicas laboratoriais atuais.